关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。2 B* h; e3 f6 M+ N! c: o* R
+ f; `) w. j# G3 q5 `6 N9 f
有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。0 K7 e7 X: r! p' x$ e* R) v; M; i8 c
我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？3 _5 F8 v4 n2 R6 j
2 K9 ?% ~0 K# ?3 Q0 r2 E( J! G; T
补充内容 (2012-3-5 16:18):+ m- c. u  ~: |8 e/ \
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
0 |, H* B, z* c# r  v  B; \: Z+ ]# H3 b8 a$ B0 `# q
补充内容 (2012-3-5 16:18):
* d2 P9 h, n0 E  ~. Y% a, @8 K还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！3 m& Y2 g, s/ I4 [
1 `! n) m% F7 z  D
补充内容 (2012-3-5 16:18):
0 m/ m  ]& F# f  i* W, r3 K还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！& E. i& V; j/ g. y  r
- ^2 p0 K5 x: e) A% k
补充内容 (2012-3-5 16:18):! ]9 V1 E  Q# ?8 v
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
' p- z) z' |2 w- L0 V
" p9 Q. p  f: r7 X6 A补充内容 (2012-3-5 16:18):7 E6 Y1 v, z0 s, n) n5 U
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
$ ^8 U, M% F2 ?) U9 F, b
) E8 v" h+ V3 Z4 C5 M! U; P补充内容 (2012-3-5 16:18):
: O& o; V" y. }" r! H0 e! t还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了... 0 Z* Q; T% R# \" ^1 K% v1 O
还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子$ l7 X! b# Y- g

9 T8 p8 d& F+ ]/ e嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~5 {8 Z8 Z5 w/ W* ~% g2 s7 t/ `9 a5 [
我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子# d# X0 Z- o$ u  r
4 l% m- |4 t0 {$ a& C# L9 W" }, @% O
你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！
1 F8 X2 h; R$ w4 \/ @5 ~, I3 y1 f
另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。
* d+ K. @! Y, d% X2 j6 q4 K
3 ~. C# O+ d" s  I  s戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。0 ]) E/ U7 [4 a, @

1 F/ {7 h% r# X+ xMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子. R" H! w# J$ I( b" ?& Y. j+ p
# E: O/ z- q9 r9 n5 z& P
谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？' F  V0 B- u; o2 M/ S4 a
8 `9 W9 o$ O# K' F4 S
到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？
6 @7 Y) J, t! i7 k4 y$ x戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子! r+ z! {) B' h% J* _$ X

6 d& V. g( D+ w:D:D:D:D