关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。- h+ J3 s9 O6 Q8 G0 U
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有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。$ w& ]. o2 W9 h9 q) M; P+ k- S
我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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" S, V; R$ J. ~) [/ m- x- e  g补充内容 (2012-3-5 16:18):2 ^8 n. V/ C: k, J1 ~
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
5 b8 [- H9 c+ [) w$ A0 C" ]) T还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):( j9 A6 v& q9 ?0 j
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
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补充内容 (2012-3-5 16:18):8 K/ q% K( n% v, R7 A
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！' b1 E6 z7 o: v+ A
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补充内容 (2012-3-5 16:18):5 ~5 i- a4 N& f& j( i
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了...
) a0 z" c+ l& ~% O/ t8 A还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
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- L) [4 _+ E* N. t! _  x4 S嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
; X5 l% V& ]; ?" u# n5 s) Q  d$ Z! @我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子! ~' v! ~; N, X* b7 J6 v3 I& E1 K

- \* F+ c8 V5 O  q; X3 V你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！5 h/ i, r. ^# D& I4 E  K4 k9 p

  I7 P# x& p0 N4 s另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。1 Y8 V  |0 k; F8 F# g' \6 O/ C
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戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。
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MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子" M: x) H& Y3 w

" h& f: V1 I; T  D: W- }8 y" `谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？) L- `# r# m5 l" |
) r* Y) m% O& ?
到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？+ i- t  k: E# E
戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

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