慢病毒感染细胞

huangcong1988

诱导iPS，病毒滴度测定后，要感染供体细胞了，但是不知道病毒颗粒与细胞数目的比例，文章中都没有提到说病毒颗粒与供体细胞比例，但是个人觉得病毒数目跟供体细胞数应该是一点比例的，不然就没有必要测定病毒滴度了，也没必要浓缩慢病毒了，所以想知道大家一般感染细胞的时候病毒与细胞数目比例是怎样的？怎么确定呢？

rexhz

可以先测定最佳感染复数MOI

huangcong1988

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! }6 n' s' n" O6 I0 F6 G谢谢，我是做iPS，现在滴度已经测定了，准备感染细胞，但是现在不知道病毒用量，就是说不知道病毒颗粒数目跟供体细胞数目的比例，所以想知道大家在感染时是怎样确定病毒与细胞比例的

rexhz

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! f* Y2 [/ D8 G1 `4 W2 D- C
1 z, J0 f! ~: n$ u% NMOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

huangcong1988

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4 @( s/ d( [! [9 B! v. D5 u) h+ u9 N* V; h: X
我的质粒不带荧光，所以我测定病毒滴度的时候只能用定量，所以就没有测MOI，还有MOI是什么指数？我直接测定的是病毒颗粒数（当然也包括不具备感染能力的病毒）。由于我的质粒不带荧光，所以没法肉眼看感染效率，请问，这样该怎么办呢？怎么摸条件？你们一般感染的时候病毒用量是多少呢？跟细胞是几比几？

不倒翁

我们一般不测 只看GFP得亮度来估计病毒的滴度是否够用 各个病毒的比例更重要

huangcong1988

回复 不倒翁 的帖子9 n2 q5 q( G! L- B$ @4 H) A4 V

3 j3 |2 I0 |$ @. O! F3 O8 @我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？

rexhz

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6 f: w8 ?( T" y3 w0 Y' {. }9 W7 c9 C
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。, s8 o9 u) t5 ~7 V  q! J4 S
" M' M5 u; f# x1 c- k" K
Multiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  * u3 b+ ]2 j- G$ t
It is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI 9 V2 q1 U5 ?0 d' F
be tested.   
$ {* J0 t% Y. r# |! ~! Z* m
! r3 G) S. R0 o1 R7 XTo calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units
6 p5 ?+ Q% I, t4 @needed (TU)
( O0 N& l8 Y! _2 G% M. N 7 J; U$ g: d0 p1 y- r- P. V
(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to
3 m1 N: V' d2 k8 p+ }' p* v8 weach well

daviddow

MOI=10

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。