慢病毒感染细胞

huangcong1988

诱导iPS，病毒滴度测定后，要感染供体细胞了，但是不知道病毒颗粒与细胞数目的比例，文章中都没有提到说病毒颗粒与供体细胞比例，但是个人觉得病毒数目跟供体细胞数应该是一点比例的，不然就没有必要测定病毒滴度了，也没必要浓缩慢病毒了，所以想知道大家一般感染细胞的时候病毒与细胞数目比例是怎样的？怎么确定呢？

rexhz

可以先测定最佳感染复数MOI

huangcong1988

回复 rexhz 的帖子, g$ i2 J+ e+ V3 U: N$ T/ n

* [& C9 O8 ~2 Y: A5 t3 p  q7 t谢谢，我是做iPS，现在滴度已经测定了，准备感染细胞，但是现在不知道病毒用量，就是说不知道病毒颗粒数目跟供体细胞数目的比例，所以想知道大家在感染时是怎样确定病毒与细胞比例的

rexhz

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* L6 V- s8 k" r' C
: c' |9 D- f. EMOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

huangcong1988

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+ C( A  o7 a2 @: P/ w4 Z9 F
4 J: S' J+ g1 X' ]# u我的质粒不带荧光，所以我测定病毒滴度的时候只能用定量，所以就没有测MOI，还有MOI是什么指数？我直接测定的是病毒颗粒数（当然也包括不具备感染能力的病毒）。由于我的质粒不带荧光，所以没法肉眼看感染效率，请问，这样该怎么办呢？怎么摸条件？你们一般感染的时候病毒用量是多少呢？跟细胞是几比几？

不倒翁

我们一般不测 只看GFP得亮度来估计病毒的滴度是否够用 各个病毒的比例更重要

huangcong1988

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. o  F# F& v& t( J  C$ }  W% G2 @# c3 }: Y- L
我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？

rexhz

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1 r! R8 d. A9 {, ]: O8 t  b, U% r4 Z" X( Z$ L% \. l: q+ V$ u
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。
* O4 l, u" |, [5 {7 ~# ?( w. ?8 `6 ], m& Z# U& [+ @' O
Multiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  5 a& Q  I! ^7 H$ O; T& q! T: X8 e
It is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI & s9 I" G% l4 C6 C: ^' B
be tested.   + m7 _1 d, m1 S6 S7 S6 H
7 G9 G' a- F9 R
To calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units 7 u9 @* Z% x+ T* M
needed (TU)
9 B3 N4 A! O6 W% T+ {6 p
5 u1 o7 v  T/ v; A(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to 4 B% q+ v7 O: t8 W
each well

daviddow

MOI=10

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。