慢病毒感染细胞

huangcong1988

诱导iPS，病毒滴度测定后，要感染供体细胞了，但是不知道病毒颗粒与细胞数目的比例，文章中都没有提到说病毒颗粒与供体细胞比例，但是个人觉得病毒数目跟供体细胞数应该是一点比例的，不然就没有必要测定病毒滴度了，也没必要浓缩慢病毒了，所以想知道大家一般感染细胞的时候病毒与细胞数目比例是怎样的？怎么确定呢？

rexhz

可以先测定最佳感染复数MOI

huangcong1988

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& J- |  P- o6 z' f- P
6 J9 T& S0 @% H( |5 N' z谢谢，我是做iPS，现在滴度已经测定了，准备感染细胞，但是现在不知道病毒用量，就是说不知道病毒颗粒数目跟供体细胞数目的比例，所以想知道大家在感染时是怎样确定病毒与细胞比例的

rexhz

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$ I6 h# j! v9 h$ S% n5 \9 M: v& J' O. z* O& Z
MOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

huangcong1988

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5 }3 w* ]5 e! F- s8 X4 i6 n我的质粒不带荧光，所以我测定病毒滴度的时候只能用定量，所以就没有测MOI，还有MOI是什么指数？我直接测定的是病毒颗粒数（当然也包括不具备感染能力的病毒）。由于我的质粒不带荧光，所以没法肉眼看感染效率，请问，这样该怎么办呢？怎么摸条件？你们一般感染的时候病毒用量是多少呢？跟细胞是几比几？

不倒翁

我们一般不测 只看GFP得亮度来估计病毒的滴度是否够用 各个病毒的比例更重要

huangcong1988

回复 不倒翁 的帖子- |0 m# G" {5 s; y0 S/ b/ u

: z3 n4 F9 @: D- G我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？

rexhz

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' T2 f- x( Q8 T) H6 W3 p
) V6 `0 `; O3 V& q. D没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。
+ o! O, }6 E" K/ k
  p; z* {, A9 S5 Y) v4 tMultiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  
* L0 v9 }; x( o( cIt is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI 5 M' e+ i, ?5 W, v
be tested.   
: K2 w/ {. n, W5 v+ B; B, Y$ j 9 g8 w# I. K. `1 d3 ?2 v; a' l
To calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units + O" A+ O/ ~3 Y! n, q( V8 ?
needed (TU)
  U% U" Y' j  \/ p  X 8 a3 J4 z/ Q7 `1 [7 t
(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to 3 o- G% ^, I" c
each well

daviddow

MOI=10

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。