慢病毒感染细胞

huangcong1988

诱导iPS，病毒滴度测定后，要感染供体细胞了，但是不知道病毒颗粒与细胞数目的比例，文章中都没有提到说病毒颗粒与供体细胞比例，但是个人觉得病毒数目跟供体细胞数应该是一点比例的，不然就没有必要测定病毒滴度了，也没必要浓缩慢病毒了，所以想知道大家一般感染细胞的时候病毒与细胞数目比例是怎样的？怎么确定呢？

rexhz

可以先测定最佳感染复数MOI

huangcong1988

回复 rexhz 的帖子
- u3 _- N* Y8 m' z* H* L4 r" s+ G$ _& k/ G# K/ _' M
谢谢，我是做iPS，现在滴度已经测定了，准备感染细胞，但是现在不知道病毒用量，就是说不知道病毒颗粒数目跟供体细胞数目的比例，所以想知道大家在感染时是怎样确定病毒与细胞比例的

rexhz

回复 huangcong1988 的帖子
) O$ i: a2 Z' s! e& c( m1 `
4 X) g. b4 m! N; u% ?MOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

huangcong1988

回复 rexhz 的帖子# U5 Z0 ?/ z/ x8 N$ L+ `

' q2 K8 V2 @, N我的质粒不带荧光，所以我测定病毒滴度的时候只能用定量，所以就没有测MOI，还有MOI是什么指数？我直接测定的是病毒颗粒数（当然也包括不具备感染能力的病毒）。由于我的质粒不带荧光，所以没法肉眼看感染效率，请问，这样该怎么办呢？怎么摸条件？你们一般感染的时候病毒用量是多少呢？跟细胞是几比几？

不倒翁

我们一般不测 只看GFP得亮度来估计病毒的滴度是否够用 各个病毒的比例更重要

huangcong1988

回复 不倒翁 的帖子' x! a* O& h1 Y% U, s

! ~9 Q1 O% X; j, e我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？

rexhz

回复 huangcong1988 的帖子; L8 ]3 |# ~# l
* e2 [9 G/ U4 D5 w* d- A% G
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。: E' y9 \  S, N' K

; j4 J" V, o( b: h! C- YMultiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  * }9 s8 z! D  f
It is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI
: r# q4 J8 v  A) h. @1 U$ ?8 Dbe tested.   
6 P, ^* x8 n4 S9 d, ` 7 Q1 i+ \; q! X4 r% v
To calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units 3 m* q8 C% B, u3 ^! S- V
needed (TU)
0 a$ O6 z9 @; N. P6 @ 4 d' ?# U1 L( a! p3 N: ^
(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to % L; L0 |( f4 J* m8 R  i
each well

daviddow

MOI=10

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。