错在哪一步，望赐教！------谈脐血分离MSC

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具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白膜层不是很明显）---PBS洗两便---一部分养在DMEM中想得到MSC，另一部分养在EGM中为了得到EPC（用的是培养瓶，没有铺胶）------可三天后换液（换液时没有发现贴壁的细胞）------换液2天后发现瓶中仍没有贴壁的细胞。结果什么也没培养出来，步骤中哪一步错了，望赐教！

丁丁儿

那请问你见到细胞了吗？就算没有贴壁的，在显微镜下观察应该也能看见细胞啊 ，再说了，红细胞裂解液本身就对细胞有影响，很可能导致细胞死亡，试着变化一下红细胞裂解液

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, l0 ^) P0 L! {( ]0 [' j, k/ Z5 k: s7 L, z
你指的是取原代时不铺层吗？

Demon_CN

试验前准备。
9 h: q1 e, |/ g. _+ ~个人觉得你要准备经过TC处理过的培养瓶
3 r  G3 ?. {9 S7 Z6 [8 o. _培养基，L-DMEM+10%FBS（血清里还有丰富的营养，还有促进细胞贴壁的因子这个是以前学长告诉我的，不要问我具体有什么因子）
# w9 Q( y0 D) _& |0 B7 H* [开始做试验
' ?; x7 K4 f* |7 o$ N4 E% W% ]' C$ x按照你的操作，我觉得问题不太大
% X# \4 o& O) j8 x1 U具体你的接种密度多少，我接种纯的MSC是1*10^4个/m2 ,不知道那个里面msc的含量，感觉这密度长的最好
8 w8 f8 A: ]* Z. J8 Z1 R# F. `$ {一般第一次贴壁要长点时间到概4-5天，第二次传代2小时就贴壁了

henryjia

回复 542177563 的帖子5 b4 d% q7 U; u/ h9 A
2 y+ ]  T3 W  `6 C7 I
建议铺层，但是我确实实验过不铺层，也一样能长。

542177563

回复 henryjia 的帖子, M1 L. ?; x. F

! f- j. H2 }4 n% Y养EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

Roden

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" ~0 z4 Y4 p3 C& b/ o6 J; x
* p3 q2 J+ a8 V0 {脐血间充质的成功率大概在20%~30%，楼主可以一气儿多养几个。0 _& S% w" e# V$ @1 y9 B
贴壁细胞呈集落的速度与细胞自身和培养环境都有关系，不知今天爬出来否？

henryjia

首先，RBC裂解没有必要；直接梯度离心以缩短离体时间；再者，长出细胞克隆一般要8-10天，耐心，淡定。
2 t2 A; \1 E. V9 e
: Y7 v0 ?) L$ u. f" b如果用EGM2培养液提取EPC是一定可以的，脐血EPC比MSC多多了。千万要注意一个问题就是不要因为担心其他细胞污染，就过于频繁换培养液。
9 [, H9 K9 E' [
6 T. q7 h; ?3 @5 N$ j祝好运。

wind789

回复 542177563 的帖子6 t/ ]# v: `) \5 ]( L3 P
* I7 M5 u0 i6 b1 @/ C- N
我们也正在摸索脐血MSC，推荐一篇文章给你。共同加油！

evial

裂解了就不要去分层，不会有分层，上清都是不要的东西，沉淀下来的才是你要的东西，你把孩子当垃圾倒了，当然后来就没有孩子养的出来了