人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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回复 hhxxattxs123 的帖子0 x7 K* F( f# h1 ~' m: ^: v
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$ |' D8 J* m5 J组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。7 `, s6 s8 H" ~
还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。. ]) ]4 w% z5 l
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。6 n  S* b) E1 b# J( @; t
我们一般用人脐带分离MSC。
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了  \" d& J7 f. ~1 i. N* w
时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

回复 hhxxattxs123 的帖子, p& m4 i: r6 M, ~) n
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你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。* |  G# z. @2 E4 B: k
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参考帖子：% y& i1 u. }+ Q* z. N6 `! h* e
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：* D9 b  [& R1 P
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html5 u7 s9 v- s# u, L) D: T
请教华通氏胶的剥离：4 ^+ A$ t  P! A8 A1 m( l
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html7 z: P) v, \* d% v/ t. }! ^3 b$ \
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
( p' R, T4 Q) Nhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html- t8 K( b. C, S2 L8 f! t3 C- `
脐带间充质胶质的备置：
& m5 F0 N, {+ @' q" w: g$ P8 m5 |" G& Xhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html' q# ^( n& n& j* y1 `/ q! W
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
, A0 v5 R6 [4 L) X/ ohttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html  O6 l, z# Y6 e, p% R+ X" u7 ~
脐带间充质贴壁法到底几天换液：: h- k+ [0 v7 Z8 V" Y8 \+ O3 x! X" Y
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
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参考文献：# ]! s2 U9 M  |2 |2 e" e! E

单个核细胞

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1 u" j4 R; f* [! k回复 hhxxattxs123 的帖子8 [; G' b9 _; L# N

; o! j" L" `  h9 s4 \  {/ N贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。* S; a* j' a- I+ H1 z, m: Z: d
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羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

回复 hhxxattxs123 的帖子5 ]- T2 J( i+ ]/ d+ C) a2 T
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20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

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6 C$ ^# ^* t. e# r
* I% g3 r, _( v. x  @非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多