siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？

orchard

我最近想做大鼠骨髓间充质干细胞中的两个目的基因的沉默，同时还想做体内实验，但是分子生物学这块刚刚接触，有很多不懂的地方向大家请教。如果想选用RNA干扰的慢病毒载体做稳定转染，请问大家都有用过什么载体呢？

燕北飞

GV 慢病毒载体系列、pHelper 1.0 载体和 pHelper 2.0 载体三种常用质粒。

刘森泉

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请教下，做过表达的慢病毒表达载体和siRNA敲降的的慢病毒载体是一样的么？如果不是，两者差什么？

zack

刘森泉 发表于 2012-6-7 08:49 ( D6 e, Q7 P! u; @: F! b
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# Q; V+ t2 k3 c- s请教下，做过表达的慢病毒表达载体和siRNA敲降的的慢病毒载体是一样的么？如果不是，两 ...

) \& Z9 L7 J& a. C  G
可以用同样的慢病毒辅助质粒去包装。

刘森泉

回复 zack 的帖子2 w2 U* D" ?& {* V
4 |# \) X  ~8 J. L3 W' c& e
辅助质粒共用是可以的，我意思是构建表达质粒的载体，对于高表达的和siRNA敲降的是否一样。谢谢！

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子9 O' h0 L* O1 o; d  G* u
' {7 u) j1 D  G0 D8 N
不一样，高表达的载体要选择好的质粒，对启动子的要求很高，如果想让过表达效果明显，需要包装腺病毒或者AAV。

刘森泉

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! [) F7 W6 S- m+ q5 p/ r& C5 ?! R9 p) p6 }/ V8 h
那可以用过表达的载体来构建siRNA的表达质粒？

燕北飞

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如果质粒效果好的话，大家就不用包病毒了。

燕北飞

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  h3 G2 l( H; k) E7 }
4 p5 O. F- {1 Z7 _& Z关于质粒和病毒的分类和功能，我这里就不想多说了，病毒转染干细胞专区会提供给你很好的解释。

orchard

回复 燕北飞 的帖子0 Q( j( Y) a% P
' n  _; {8 F) q8 V$ U1 R
请问你们一般是自己构建还是找公司做呢？ 如果找公司的话哪家比较好？谢谢！