如何提取卵母细胞

spy529

用透明质酸酶消化完颗粒细胞后，如何清洗卵母细胞？具体方法

星移龙一

不知楼主问的是什么物种的卵母细胞。我们这做的是猪的，先用移液器将消化过的卵母细胞在T2（TCM199+2%FBS）液中洗三遍（即做三个液滴，从一个移入另一个为洗一遍），再用移卵针将卵母细胞在T2液中洗两遍。

spy529

小鼠的，但我们需要大量提取，一次大概得五、六百个卵呢，每次都一个一个的挑出来？用离心机清洗可行吗?

hcluo

小鼠，用PMSG和hCG进行超排处理，然后收集输卵管壶腹部膨大处的卵丘细胞，最后用透明质酸酶进行消化处理，在解剖纤维镜下，可以挑选出纯净的卵母细胞。不过，获取不同时期的卵母细胞需要不同的处理方式。

肖特

需要排卵前的还是排卵后的？: T8 d+ q2 r) |. w4 I. U! `

( a* E1 J' f2 W& E针刺卵巢可以取排卵前的卵母细胞，再根据直径区分不同时期。- X7 J5 |5 a9 N# C: d
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收集卵母细胞置于液滴中，在解剖镜下用毛细移卵针吸取干净的卵母细胞，转移到其他液滴中。只取裸露的卵母细胞的话需要轻吹以去掉颗粒细胞。/ V8 X) j% q1 A; h8 c% N9 L$ v

; i% o( u' H1 l卵母细胞较大，离心会离破，在液滴中卵母细胞很容易沉降。
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4 E% I8 ]# D8 L6 K& V% E- b熟练的话会操作快点。

wxl87

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& d! B+ R: @2 Z7 @0 n
: m) v0 j  v8 R" e$ r, w这是小鼠的卵母细胞，怎么用针刺法？卵巢很小的。

肖特

% N* n1 Q2 ~: e$ A+ v) o3 U6 K: U5 y* V) Y
回复 wxl87 的帖子. r$ H7 O$ }- ~$ h; Q

; y4 b5 y: U' K小鼠超排之后取完整卵巢，解剖镜下针刺比较明显的卵泡，卵丘卵母细胞复合体会释放出来

wxl87

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6 B7 C6 [0 S  z( f0 ?. s7 _& }0 R
这个每次大概能取到多少个卵母细胞？

spy529

小鼠的一个卵巢少的可以取十几个多的有时可达三十个
2 u% a0 a( i% ^; ]" v# v1 J, K

肖特

回复 wxl87 的帖子% d3 N. V/ @6 V

3 B  ?6 l! g, |) n' A超排冲输卵管每只小鼠可以取20-50或者更多个排卵后的卵母细胞。
2 \  M  ^4 d$ A' f超排针刺每个卵巢可以取50个左右，所以每只小鼠可以取100个左右。
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针刺后暴露出的如果是裸卵，大多是正在闭锁的卵泡中的卵母细胞，所以这种卵母细胞状态会不太好。0 G/ G9 E. W- Y+ {9 d
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需要卵母细胞数量较多的话就多用几只小鼠。5 R; n; s  ^0 `- V

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