求助：培养CIK细胞时候怎么去除红细胞？？？高人解答，谢谢

113305060

我做CIK细胞培养，首先提取外周血单个核细胞，但这里面会混有红细胞，接种到培养瓶中培养，取悬浮细胞继续加生长因子培养，但是取悬浮细胞的时候还是有红细胞在里面悬浮啊，而且以后换液传代都是取悬浮细胞，那么红细胞不是一直都混在里面吗？用红细胞裂解液2次仍然去除不了红细胞，求高人解答，谢谢

evial

离心沉淀细胞团后加入红细胞裂解液，冰上放置5-10分钟，经常震一下，然后加PBS15-20倍体积离心后就能去除，沉淀下来的细胞团是白色的，这就成了。当然裂解液质量也是要考虑的，用流式专用的比较好。

yaolinzhang

提单个核细胞的时候红细胞就沉淀去掉了就

113305060

麻烦再问一下二楼的大神，我用的红细胞裂解液说明书上写再入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，混匀，然后离心，不知道哪种方法对，麻烦您解释一下，谢谢

大少爷

外周血提取单个核细胞的时候，选择合适的分离液，合适的离心参数，多洗涤几次，红细胞就应该去的差不多了5 P6 M2 n3 F+ d9 Z7 b
，然后经过十几天的培养，扩增，收集时的洗涤，离心，在洗涤，红细胞会去除的比较干净。
3 R2 G, |0 M0 q+ ^, S, [& d  e3 o, L: o4 t/ h
另外，如果培养扩增后的CIK任然有许多红细胞时，也不能用红细胞裂解液裂解，扩增后，由于细胞量& \" T& A& _- Q+ N0 f
太大，对裂解液的量以及红细胞裂解的时间根本不好把握，而且会对CIK细胞有很大的伤害，造成的后果
# q! J' Y+ J. i可能很严重，不建议裂解。
7 u. F. {( q$ i$ E5 }
3 a5 Q/ T% C; X1 F- n$ v3 C6 d) X& s外周血培养的CIK如果用于临床治疗的话，也只是用于本人，有红细胞也没什么问题。而且即使是脐血培养的，
, b5 N8 [$ L! Z* [+ T- F0 }CIK回輸时一般要求十的九次方以上的细胞量，有少量的红细胞也是是没事的。
/ o" e5 }* A7 N# J; G8 o6 H1 ?
$ u7 u7 o& I8 h, R2 G* h7 {如果实在是要裂解的话，建议在提取单个核细胞以后裂解，加入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，吹打混匀几十秒，4 S* H& _0 I5 t# Y
待悬液的红色变淡时立即加盐水终止裂解，混匀，然后离心。效果会好点。
: c. a  W, y1 O+ n

113305060

好的，谢谢大家的回答，我还有2个问题想问一下，刚刚接触，问题比较多，呵呵, q% }" Q1 Z/ C
1.培养基的使用，我们实验室以前一直使用DMEM培养间充质的，我查文献上面说养PBSC需要用1640培养基，请问用DMEM可以替代吗？两者培养对PBSC影响大吗？2 w  I$ `. s- |+ \
2.我前天提的PBSC（外周血单个核细胞），放在直径100mm培养皿里面培养，48H后换液观察发现有一些点状贴壁，请问一下PBSC贴壁是不是也像间充质干细胞一样一开始呈现梭形，谢谢！

evial

一种是直接破红，在血液里加入裂解液，是用于检测，因为要加说明说体积的裂解液。另一种使用分离液提取，这样基本就已经去除红细胞了。不知你用的是哪种。

细胞海洋

回复 113305060 的帖子+ p1 O: t/ q1 y, P1 ~  @5 f
( q4 _: a  m. x3 C$ P" F4 j- t, d
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样) i" |, @5 `3 n& i
1 A& J( [3 M4 j7 B
否则他会看不到
$ N$ J( _1 j- X2 y( ^6 \, s/ M, \2 y" c4 ]4 U. g5 V
另外建议重新发个贴子提问 这样问 很少有人能看到

113305060

回复 细胞海洋 的帖子
6 A# i+ k& R" u2 i: H1 x; [/ l
+ G) c# k# _- T1 k) M8 `- |5 j好的，谢谢

zuming

关键看做什么用，如果是给病人回输的，混有一点点红细胞是无所谓的，不影响。没必要除掉。