MEF原代 第一次传代

wawj

这次做的ＭＥＦ原代，状态很好，种了六个Ｔ７５大瓶，昨天是第三天，传代，冻了５管，传了一瓶，一传二。奇怪的是，今天看传的那两个大瓶液体变得很黄，飘得细胞较多，贴的也还可以。不会是污染吧，那冻得那几管是不是也不能用了。
! H* @; ~- `0 r" m# [分析原因：
1 H4 x  S7 p; ^  S; o3 d- |  ]１，昨天传代时细胞量比较多，每个瓶子接种的细胞都比较多，会不会因为细胞比较多，增殖较快，液体一天内就变黄了。
1 Z/ F# A; x$ Y" C7 s' i* b5 o5 z２，昨天传代时上一瓶高糖ＤＭＥＭ刚好快用完了，所以用新配的高糖ＤＭＥＭ，不会是这个液体有污染吧，今天已吸了一点液体放到离心管里培养，明天继续观察。
+ }# P& D% p- b0 Y4 r３，以前还没出现过这种情况，今天看到液体很黄，怕是污染，不知道该扔不，就把两瓶细胞都传了，种了一个大瓶，其余细胞扔了，继续观察中，不知道这种处理对吗？请高手指教。5 `0 i& J- z; P5 K9 |- i9 N* W
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jiefengbing

液体变黄太快可能是细胞数量有关，你仔细观察下你那飘得是细胞还是很密的细菌？一般来说MEF到第三代状态还应该不至于飘起来。

akxiaoqiang

回复 wawj 的帖子0 V. v' c- {1 j% [$ W9 K# Q$ t7 F) d3 ~

  q) S2 \2 i3 `  \染不染菌镜下一下子就看出来啦

wawj

回复 jiefengbing 的帖子2 G+ v. O) v& w5 L

% ]% M1 A+ Y* ^" L3 Y$ j没污染过  不知道  感觉跟以前飘得细胞不一样  细菌飘起来是啥样

wawj

回复 akxiaoqiang 的帖子
, u5 H! F. I" g, N. L% B  u2 K; v2 E9 e. p4 m% p# G
咋看呢，求赐教。以前没遇到过

wawj

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, Q/ \* a7 p/ y8 }  }5 ?" k) R( N" s+ l6 S
+ O+ p" ?/ S- w2 n3 o$ o/ v# ^7 [今天其实还仔细看了，不像是细菌，但因为没见过，也不清楚。还有一个小细节，今天传代时细胞很难消化下来，不知道有什么提示没，消化步骤都跟以前一样。

chentian820

与其找原因，还不如把培养基什么的过滤除菌，然后再做一只老鼠。节省时间。

wawj

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2 w! W0 D. u1 G! u5 ~8 q1 u. R
' m- U! |" x. f+ w5 |. ^2 f" o说的也对，就觉得这只老鼠白白牺牲了。刚冻的细胞能拿出来复苏吗，效果怎么样？想复苏一管，看那些冻得细胞是否也污染了。

wawj

回复 jiefengbing 的帖子6 S9 \3 X- \" E: e
* s# \/ k: w( o6 {# N
被您猜中了，昨天传代，今天一看，液体又变黄了，基本没贴壁的，飘得是很密的细菌，感觉还在动，是细菌吧，还是什么更恶心的污染。我把细胞扔了，昨天放到孵箱的离心管的液体没变黄，但也不能排除有污染，准备重新配液体。冻得细胞想复苏一管看看，如果也污染了，就要重新做老鼠了。又得重来一次，深恶痛绝的污染啊！

刘森泉

回复 wawj 的帖子2 r6 S- Z8 D6 x0 J% O$ L# f6 _

) K* ?8 p" A/ R什么方法做的MEF，状态比较好。能分享一下吗？谢谢。