MEF原代 第一次传代

wawj

这次做的ＭＥＦ原代，状态很好，种了六个Ｔ７５大瓶，昨天是第三天，传代，冻了５管，传了一瓶，一传二。奇怪的是，今天看传的那两个大瓶液体变得很黄，飘得细胞较多，贴的也还可以。不会是污染吧，那冻得那几管是不是也不能用了。
2 V; z4 G/ N# X4 M. ?分析原因：
8 E% ]& C1 V% M9 Z! \% H# K( t１，昨天传代时细胞量比较多，每个瓶子接种的细胞都比较多，会不会因为细胞比较多，增殖较快，液体一天内就变黄了。
+ l! W; Q+ M4 q２，昨天传代时上一瓶高糖ＤＭＥＭ刚好快用完了，所以用新配的高糖ＤＭＥＭ，不会是这个液体有污染吧，今天已吸了一点液体放到离心管里培养，明天继续观察。
( Z% t* M: f% y) I; ~9 F3 e9 X. x３，以前还没出现过这种情况，今天看到液体很黄，怕是污染，不知道该扔不，就把两瓶细胞都传了，种了一个大瓶，其余细胞扔了，继续观察中，不知道这种处理对吗？请高手指教。% `- F) Q* L" j

+ [5 m, J( z- o# C$ }

jiefengbing

液体变黄太快可能是细胞数量有关，你仔细观察下你那飘得是细胞还是很密的细菌？一般来说MEF到第三代状态还应该不至于飘起来。

akxiaoqiang

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* Q: k6 t; ~. t6 @" D5 Q+ J染不染菌镜下一下子就看出来啦

wawj

回复 jiefengbing 的帖子$ P' [/ p/ R) _5 ]; H9 t
4 a3 s# X9 @6 I. K. V, F
没污染过  不知道  感觉跟以前飘得细胞不一样  细菌飘起来是啥样

wawj

回复 akxiaoqiang 的帖子  t' _4 u3 l; v# q( F

4 e: E  w) w3 D# O咋看呢，求赐教。以前没遇到过

wawj

回复 jiefengbing 的帖子  |: B5 s0 a9 o5 @7 H6 _) s+ A
6 |* c0 t' `" I8 |# {- X
今天其实还仔细看了，不像是细菌，但因为没见过，也不清楚。还有一个小细节，今天传代时细胞很难消化下来，不知道有什么提示没，消化步骤都跟以前一样。

chentian820

与其找原因，还不如把培养基什么的过滤除菌，然后再做一只老鼠。节省时间。

wawj

回复 chentian820 的帖子% l2 B+ i3 }$ Z- ~0 u! m- x

1 P% z* F: j! A$ d8 u; z% ?0 v说的也对，就觉得这只老鼠白白牺牲了。刚冻的细胞能拿出来复苏吗，效果怎么样？想复苏一管，看那些冻得细胞是否也污染了。

wawj

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) @, @: S( @' `3 S, z  s
被您猜中了，昨天传代，今天一看，液体又变黄了，基本没贴壁的，飘得是很密的细菌，感觉还在动，是细菌吧，还是什么更恶心的污染。我把细胞扔了，昨天放到孵箱的离心管的液体没变黄，但也不能排除有污染，准备重新配液体。冻得细胞想复苏一管看看，如果也污染了，就要重新做老鼠了。又得重来一次，深恶痛绝的污染啊！

刘森泉

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什么方法做的MEF，状态比较好。能分享一下吗？谢谢。