对于DC细胞的一些疑问，请师兄解答!!

冠忠

我在文献中看到好多有关培养DC细胞及令DC细胞成熟的方法，我有以下几个问题，希望师兄可以帮忙解答，谢谢
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+ V' s8 }5 B' h/ M' n$ a: Z' R1.        我想知道，DC细胞培养是否跟普遍adherent细胞培养方法一样，长满了就可以做subculture?但是我见到有师兄说，有时间DC细胞是不会贴壁。
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- `9 C5 B% q0 B; b. I  R$ _/ o  z2.        一般来说，DC细胞可以增值多少代?如果用100毫升周边血，一开始应该用T25培养皿先培养吗?
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1 V' n# }; Y$ X4 E) b3.        我想知道，现在文献说，用I=RPMI-1640, GM-CSF 和IL-4的培养液培养出的DC细胞是否叫Immature DC细胞>? 加了TNF-Alpha培养的是叫mature DC细胞? 对吗?0 p  i/ ?7 j8 E% j
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4.        在文献中，我看到好多文献说，mature DC细胞先可以产生作用，那么如果用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上有什么不同? 那一个较好?
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1 `5 C2 l+ ]9 _, m% O" t% E谢谢$ e* ~0 |8 D! I; y1 ?

apai2003

1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF 和IL-4诱导单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟DC会逐渐悬浮起来；$ `! S7 K: w/ C5 }  u! h
2.单核细胞来源的DC是不可以增值的，一个单核细胞只能转化成一个DC细胞；具体用多大瓶培养要看你拿到的PBMC数量（再细的话还可以考虑里面单核细胞的比例），我们一般按照3x10^6/ml的密度铺瓶，通常情况下，100ml外周血拿到1x10^8的PBMC应该没问题，可以采用T75培养瓶；, g, @, P9 z' Y0 a. c
3.成熟DC和未成熟DC不能简单按照加了什么因子来决定，目前主要根据细胞表型来判断，未成熟DC低表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，而成熟DC高表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，且表达DC成熟标志CD83，通常用GM-CSF 和IL-4来诱导单核细胞向未成熟DC转化，之后可以用TNF-Alpha来促使未成熟DC向成熟DC转化；
3 V  x! W' k0 z* I6 k6 ?5 c; P6 r4.没太明白你的意思，但目前临床治疗用的DC普遍都是负载特定肿瘤抗原的DC，这样回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。- a+ T. L- N- z; t1 @  l" q4 h
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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冠忠

大少爷 发表于 2012-7-23 11:41 3 U1 n" |* B" v: X
用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上 ...

# y9 ~; W, l, I, U谢谢师兄的解答。
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想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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+ @1 {, K2 P' p3 r8 Z' k谢谢" l8 R3 U7 ]) T" h4 {

冠忠

apai2003 发表于 2012-7-23 09:12
$ a% Q- D1 n8 G" f1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF ...

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谢谢师兄的解答。
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4 N3 f" y* e* T想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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谢谢2 L: X" V$ B$ p# C4 O* d

大少爷

肯定要加