对于DC细胞的一些疑问，请师兄解答!!

冠忠

我在文献中看到好多有关培养DC细胞及令DC细胞成熟的方法，我有以下几个问题，希望师兄可以帮忙解答，谢谢
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& l6 u9 s' Q+ P  @/ U1.        我想知道，DC细胞培养是否跟普遍adherent细胞培养方法一样，长满了就可以做subculture?但是我见到有师兄说，有时间DC细胞是不会贴壁。
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. U7 H* t+ C3 ?  J. |2.        一般来说，DC细胞可以增值多少代?如果用100毫升周边血，一开始应该用T25培养皿先培养吗?
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3.        我想知道，现在文献说，用I=RPMI-1640, GM-CSF 和IL-4的培养液培养出的DC细胞是否叫Immature DC细胞>? 加了TNF-Alpha培养的是叫mature DC细胞? 对吗?* E; j! ~& J) E/ U  F3 c6 M

4 |- L; ?2 _# {$ `# t7 [6 k- b4.        在文献中，我看到好多文献说，mature DC细胞先可以产生作用，那么如果用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上有什么不同? 那一个较好?
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谢谢8 ]  F  x2 n' h5 U4 J- b( r. h2 b/ ?: i

apai2003

1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF 和IL-4诱导单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟DC会逐渐悬浮起来；
% S& F; }4 \7 I! O! `2.单核细胞来源的DC是不可以增值的，一个单核细胞只能转化成一个DC细胞；具体用多大瓶培养要看你拿到的PBMC数量（再细的话还可以考虑里面单核细胞的比例），我们一般按照3x10^6/ml的密度铺瓶，通常情况下，100ml外周血拿到1x10^8的PBMC应该没问题，可以采用T75培养瓶；
9 H3 M4 I& b1 ]3.成熟DC和未成熟DC不能简单按照加了什么因子来决定，目前主要根据细胞表型来判断，未成熟DC低表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，而成熟DC高表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，且表达DC成熟标志CD83，通常用GM-CSF 和IL-4来诱导单核细胞向未成熟DC转化，之后可以用TNF-Alpha来促使未成熟DC向成熟DC转化；
) ?1 S6 s- M0 I$ t5 P0 G8 J4.没太明白你的意思，但目前临床治疗用的DC普遍都是负载特定肿瘤抗原的DC，这样回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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7 R. m/ H# ]1 @- \. o4 E9 x单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。1 A; V% _4 |! S; H( y. j
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大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。: ~1 h: B2 V+ w

' k+ X) I( \0 U5 ~! l& H" C+ [单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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冠忠

大少爷 发表于 2012-7-23 11:41
5 O& w3 T& B) ^5 r& Q- P3 o0 a. c# E用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上 ...

6 Q' D* V* X: V/ c$ n& s8 V! V: L1 ^谢谢师兄的解答。
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想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。$ q# x+ R# n2 \8 [

" T0 I) f: @% x5 L2 y; F谢谢7 d* A, o3 y! P: M% V6 f, M

冠忠

apai2003 发表于 2012-7-23 09:12
6 v- W' Y2 R" n7 M' P/ [8 a- l1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF ...

7 _; A: T# I4 [- m7 T, j7 _) T& j谢谢师兄的解答。
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( G& l% i7 _& Q想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。+ b3 @2 p% c  B: K+ i! s

3 t+ O* n8 g& S* u2 ^: ~0 |谢谢
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大少爷

肯定要加