骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下: D; C; Z$ o- R8 O% j" z& S
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
1 A- e! k  N1 `1 ~2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；: s- X; n/ w0 S6 D: @$ k5 i
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
  H7 \# d: U. I6 b7 g% O, ?4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；' ]9 l8 O2 |+ ^4 S& d
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。+ H7 f! y- x. p# V& Z" u* e. W
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
, R) m1 e; {8 t/ `0 j首先从分离细胞说起吧，+ Z$ c# N  v, |& l& o4 g' ?" N
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
4 Q# ~- g6 v  w" y8 y* q1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
7 v) m. n  U; X5 \  M9 P2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心# a0 Z+ h( \7 Q4 ~: b  _7 ]' r& ~4 q
3、800g。20分钟，20度( g1 r5 T+ D- U7 h) l/ L+ \
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积& Q% a3 X2 u3 C4 S* Y3 B2 s
5、300g,10分钟，4度，重复一次
% Y9 f; f) O" S. A! f; r* m5 m6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧" W! ^* |$ G2 t, i& x6 j
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
! X9 }" q1 ]8 E& V2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
  z7 K, R4 f% L( ~! x$ j+ X9 c3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。, N* g$ e, ]4 M! ^. m6 a+ h
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题
0 z: \* \% o% |$ O) y1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
6 z2 Q# [6 k6 o2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

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" F5 p( D7 L( n! i9 u
' T) B4 X8 U, m3 C' u2 y有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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