骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下3 c! G: ?/ j- r3 {7 \1 C( `
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
$ n9 w7 h' m! n4 B; A# D/ u2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；$ s5 N* |1 r# g3 G  ~0 h" ^
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
7 V5 E; N7 t5 S1 l$ H' \  x! z4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
6 y) T1 G/ W6 N7 f5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
5 m& E6 l! |, X/ {各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
3 R; c0 v+ R1 H, q9 H0 w首先从分离细胞说起吧，7 L5 v& t" P# d4 e
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，: }1 O; c* w" E6 P7 C
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
! r/ I- E% a8 c0 X3 c2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心. Y3 H2 M: h9 q- E5 t
3、800g。20分钟，20度# Y+ s% W2 O8 b) [& ^
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积9 w& Y& |# L, K) C2 R/ H* s# O6 v, e
5、300g,10分钟，4度，重复一次
0 g- I# X9 `, G) V& Q: n3 F6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧. {4 R1 s3 y' R
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
4 O4 D' W% f0 Q$ `7 A0 I2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
% w" J9 x7 r1 U5 L' H4 s6 _3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。6 N3 J; I7 _/ A' t
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题: I' r/ q# N+ J# k; b- ]
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种6 c0 ~+ R; H: w& ^* k: n# p
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子: o- p# \- G% @. m

6 x: V7 m+ @4 C7 s& m0 k7 ]有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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