关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

! f6 i% B. J3 c6 V/ A

6 P) C9 V6 Z" J" U+ P- U- e最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系
+ G& t4 p' L, L  W4 M结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。
! K) Y/ E& b  N" E& ~7 k, c- B1 D1 R' ^大家有遇到过这种问题吗？
2 q! W$ I, J* W- M4 l# N6 D6 B5 e
我用的培养基:/ x. z+ ^$ v3 s# M# P
N2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      : R& F/ {3 P. T1 Z; I4 K$ @
看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。
$ A- S4 f) Z6 H. D# ~1 {; ]+ d+ }) r( [$ D2 h& M
在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：$ B+ g+ o7 Z2 v% o4 d

2012-8-8 21:45 上传

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9 y9 b6 N4 G# @( B% i将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：
( [3 b0 r  G& O9 {) U

2012-8-8 21:41 上传

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zmm

回复 vegetax4132 的帖子
, G2 Y& t* |8 }: f, E$ V7 Z+ m1 \/ ~4 q$ @
你需铺些基质，克隆就会贴壁了。

vegetax4132

回复 zmm 的帖子; q2 d- L4 @0 `: b$ f* g

3 [' o  Z7 l' f# V3 U+ w, E基质？  是什么啊？   

frankieisme

回复 vegetax4132 的帖子1 @+ N# k/ l2 O2 i4 n
9 X' S7 O0 y9 Q; w( z; g
有一种"matrigel"

vegetax4132

回复 frankieisme 的帖子) {! ]! D$ ]6 @) s: k
0 M' q) B$ R7 @$ O' X! P
哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

zpzp0312

; g/ Q- L/ t4 i+ P, V- f3 L/ Z: X  l7 @8 d; _8 e/ |
其实你这种转移到饲养层上的细胞球也已经有分化倾向了
( q# S+ {3 `- u另外，matrigel我们使用过，只能说效果不明显$ h% _: v, Z5 G5 X6 n  o6 u
当时我们使用的是ESGRO feederfree medium" [" V& S0 F3 d) `) L1 c8 r
效果和楼主的这两张图相似
! ~0 Z+ c0 |! w$ ]9 K在matrigel上面也不能很好贴壁，有大量的细胞球似乎和基质有些黏连，但适当晃动就会飘起来
$ c# ?. W: E) {& a/ s: G' s5 A转移到饲养层，就可以发生贴壁，但是也有分化倾向
, c, H+ r0 [9 u; g但如果直接使用饲养层培养添加这个培养基，细胞生长状态还是不错的
9 [1 E6 N  T+ P6 u1 dfeederfree效果不满意

zmm

回复 vegetax4132 的帖子4 X# Z3 A+ U# E; b
# u$ S2 S2 N6 W+ ^' H; Y
明胶等都可以

vegetax4132

回复 zmm 的帖子$ ~: U+ N+ q/ x
; b5 b7 I; d/ k: {- ^3 x* p1 G
我是铺了明胶的，
; }7 x) n* U( K! p- o* B( L1 I最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

回复 zpzp0312 的帖子+ M$ X9 X% l, B/ {. x
* C0 x& Z( l# g( \( _. Q9 V0 F
谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      , Y% p' a6 u4 }# d
我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

zmm

回复 vegetax4132 的帖子! H) I5 \# V6 K7 W: U
7 ]8 M, Q( \) J+ m( j& B( H
血清也可以。因为不含血清，所以克隆增殖较慢