问题请教我做的是小鼠胚胎干细胞的免疫荧光，想看加药后是否还能表达OCT-4

李夏

3 @9 Q7 V2 i* c5 d( \
! }3 X) d6 H% h0 i7 h( s5 D
我做的是小鼠胚胎干细胞的免疫荧光，想看加药后是否还能表达OCT-4，SSEA即是否还有自我更新能力，但是效果一直不好，主要问题细胞经过多次冲洗到最后观察时已经掉下来了，由于我的药物是DMSO配置的不能紫外消毒，所以有时经过四天孵育后，细胞就染菌了。。。。有没有人能指点一下啊    感激不尽啊

李夏

回复 chenks 的帖子
; C4 g8 A. N2 U# ]0 M7 k! j8 ^& _" W8 E2 L
想请教您大玻片是可以直接买到的吗，就是做免疫荧光专用的吗？是不是这样就可以不用铺明胶了啊？我之前都是先铺明胶再铺细胞的，期待您的答复，万分感谢！

chenks

回复 李夏 的帖子
2 S# U. u. s2 h
/ s. ]5 z7 F1 L无Feeder的话,我就用六孔板,铺大玻片,但对应的抗体用得就比较多

李夏

回复 白巧克力 的帖子
9 s$ I% m3 ?0 t
% C- E! x% V3 u请问CCM具体是什么呢？我没有用过，想请教一下。
3 l2 ]+ E+ J7 v* x" B# ^/ z2 T8 q其实我的应用条件不是很稳定，经常重新复苏细胞，但是由于筛药没有办法只能用无feeder培养。这里我很想知道您是用什么条件来培养细胞进行筛药的呢？期待您的答复

李夏

回复 白巧克力 的帖子# [+ c1 L) Z1 v

! a% M7 z3 Y3 h& u; C: H2 NCCM是什么啊，我没有用过，能传授一下吗？其实我的条件不是很稳定，但没有办法，只能无feeder养来筛药。请问您是什么条件的培养基来筛药的呢？期待您的答复

白巧克力

回复 李夏 的帖子$ b$ f; V, j/ K# X( Y* L  T

5 z, V* o/ f6 W$ x5 f1 _% D我也是筛药的，不知道我们是不是很近...你一直用无feeder的，应该条件比较稳定了，其实可以考虑用CCM促进贴壁，只是要设个空白。

李夏

回复 chenks 的帖子% |, A& |! q2 ?* ?4 m( D. Z

3 B; K$ E$ G, l( J8 e! F- L, Q. \非常感谢您的答复，我用的是无血清无feeder培养法，培养基为N2B27+LIF+MBP4，因为我养的细胞主要用来筛药，所以不能用血清和feeder，否则就说不清是我的药物的作用还是feeder成分的作用，所以细胞就不是很容易贴壁，而且传代两次细胞状态明显不行了，所以很是苦恼啊

chenks

回复 李夏 的帖子
( w- p. J) f  w2 Y8 F9 |7 ]0 I* g$ v8 ]' ?5 B
固定时间可以延长一些到半小时.另外用24孔板后者48孔板,放入玻片也很省抗体的模拟可以试试.
; s$ y1 E1 M( i! d; r- _还有一个问题你的细胞有无Feeder;如果有Feeder的话,基本上细胞是不会掉的;如果无Feeder,就会掉很多细胞.

fish_zbw1985

回复 李夏 的帖子- }& v5 x9 A' P* J
" x$ W! f% ^, W+ c; Q( ]5 t, D7 D
固定时间不够 用96孔板确实不好操作  特别是ES细胞都是成克隆样的  个人觉得至少需要用48孔板

jhu132llh

回复 李夏 的帖子/ v; M, a; v) S% n: L8 _) T0 U

7 @8 V$ c/ Q0 W- u/ x; C$ a方法看起来是没问题的7 |/ ?: i  o3 ]& [2 E+ L3 N
可是你说的省抗体我倒是没看出来
. D1 x/ w! [! v0 `( k& l& H( o我们做的细胞的爬片然后在做染色的时候只需要几滴抗体就可以了