成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
& @9 j" r4 v5 F1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；4 O9 t: k5 C9 t# A3 ^, z
2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？- z( a0 l" u/ c
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huajie881026

回复 tjbone 的帖子
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请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子1 r: p$ _- ]' p% ~# c
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嗯  受教了。。。非常感谢！

huajie881026

回复 tutufei 的帖子! x% ]9 q0 f: F. B) I) n
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可能细胞状态不好导致团块长得慢' ?6 `8 S! s; g* |* A& e
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子& }$ E- b7 [9 X" E
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是的

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子' b" I' g( G( b! F
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细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子7 Z; z1 E1 ?  G. I; K/ D

+ `/ `6 S. j2 u4 K! P! J1 a嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet
# ?7 l9 {1 y5 h% g5 y! @你要不再试试

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
) Z0 V, A9 s+ u% |$ r: U. G5 U6 ^6 Y- C9 c3 C' I
一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧
- ^# r! L4 k7 {PS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了