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求助:牛与绵羊克隆过程中的融合问题 [复制链接]

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发表于 2012-10-11 22:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 hlwwd1987 于 2012-10-11 22:40 编辑 3 g+ A( ?7 Z% R- z4 i8 a

2 g/ C" g$ Q# B! i3 h" B7 u3 K    本人接触克隆时间不长,动物体细胞克隆过程中,卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作,这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。& x; j8 q6 B' n: |+ ]  b2 p
    经过本人多次实验操作练习,我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来,能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%,约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡,剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合(即使相互接触的很好)。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的,在这里想问问各位老师我的融合率低的原因,我的实验的具体参数如下:/ ~8 A+ i2 F) g/ e: d
    融合仪:BTX, _; \6 {3 G8 n$ O- v+ o
    融合参数:1.2kv/cm   30μs/次  连续2次脉冲5 d: x- {7 g! D% a% W
    融合液成份:甘露醇         0.27mM
2 [/ F6 y- f8 p2 r, ^0 v: N- E                       CaCl2          0.1mM
8 K/ O/ l) z9 {5 n4 |                       MgCl2         0.1mM% w/ V4 S" `2 [  \
                       Hepes         0.5mM: `1 t7 F4 q, \5 [; f8 d% R
                       PVA            0.01%1 {" I" v- q4 r0 S

) m: x: n7 L" o# ?" C7 T- }: I
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