求助：牛与绵羊克隆过程中的融合问题

hlwwd1987

+ s6 w. s0 \; z2 C, L( c8 B: d# r7 F9 D* d" J, J& B4 S, S0 S# I* e/ h
    本人接触克隆时间不长，动物体细胞克隆过程中，卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作，这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。) R, v- N& O% @' M% {
    经过本人多次实验操作练习，我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来，能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%，约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡，剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合（即使相互接触的很好）。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的，在这里想问问各位老师我的融合率低的原因，我的实验的具体参数如下：
9 w0 Y  G/ U* a3 M- w* J    融合仪：BTX) I# e9 f5 \1 X  b7 l8 n
    融合参数：1.2kv/cm   30μs/次  连续2次脉冲
; p; a3 V! x& X9 m, u# C" n% n6 Z" t    融合液成份：甘露醇         0.27mM' ?8 h3 L  ?+ E) y, i5 x
                       CaCl2          0.1mM: J5 m7 l3 r2 h  ^0 w. i1 b, [
                       MgCl2         0.1mM
4 i8 g4 N8 Q4 X( |                       Hepes         0.5mM4 H+ g' g& M  r2 N9 U% a
                       PVA            0.01%. J: _0 Q! C. d0 `6 j

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