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求助:牛与绵羊克隆过程中的融合问题 [复制链接]

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发表于 2012-10-11 22:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 hlwwd1987 于 2012-10-11 22:40 编辑 ' r/ E0 T! a& T0 |6 ^0 P

7 ^. q3 ~8 o/ H    本人接触克隆时间不长,动物体细胞克隆过程中,卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作,这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。/ B$ d- W0 {/ K% U- ^* A
    经过本人多次实验操作练习,我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来,能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%,约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡,剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合(即使相互接触的很好)。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的,在这里想问问各位老师我的融合率低的原因,我的实验的具体参数如下:  x8 b+ @4 @6 ^( ?
    融合仪:BTX/ E) g& G' ^& }/ U
    融合参数:1.2kv/cm   30μs/次  连续2次脉冲
' Y% i% U& U2 i. J. x! O    融合液成份:甘露醇         0.27mM
0 f1 }- q2 M. q                       CaCl2          0.1mM% [& r3 M1 J6 F3 h5 R
                       MgCl2         0.1mM( h. p; @* a, Q5 i
                       Hepes         0.5mM* b9 }9 t7 m% _/ v- C0 [' R) X3 y- s( v
                       PVA            0.01%* F9 u/ a, i' Y# I! x( C  g- l3 {- V

) t/ G0 X; t( _2 O
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