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求助:牛与绵羊克隆过程中的融合问题 [复制链接]

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发表于 2012-10-11 22:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 hlwwd1987 于 2012-10-11 22:40 编辑   M& e2 t" O5 @4 ~  X  r
& z3 F& _* z% R0 c! n
    本人接触克隆时间不长,动物体细胞克隆过程中,卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作,这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。  G6 z; W% l3 E5 \' j
    经过本人多次实验操作练习,我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来,能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%,约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡,剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合(即使相互接触的很好)。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的,在这里想问问各位老师我的融合率低的原因,我的实验的具体参数如下:
- v4 I& i8 a4 J    融合仪:BTX5 T6 I0 Z( E( K5 j" K
    融合参数:1.2kv/cm   30μs/次  连续2次脉冲8 P' S" q  ]8 D2 A8 a% h
    融合液成份:甘露醇         0.27mM
& s5 j* z& f! M2 z8 J                       CaCl2          0.1mM
. a2 b8 [: h* D* F0 o# T$ r' Q                       MgCl2         0.1mM
* y( R+ ?' w6 j1 s                       Hepes         0.5mM1 ~$ D* u, Y* H9 H5 Q* G9 y
                       PVA            0.01%" f; n! q8 K$ l3 s! t) l4 @

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