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本帖最后由 hlwwd1987 于 2012-10-11 22:40 编辑
0 g3 T& v" I+ p! U9 l2 j# D K" |0 W" ?6 M( ~2 d. u
本人接触克隆时间不长,动物体细胞克隆过程中,卵母细胞的去核、注核及二者的电融合是整个克隆过程的关键操作,这些操作的熟练程度直接影响克隆效率。2 s5 Q: ?1 w- J/ p
经过本人多次实验操作练习,我觉得电融合这步操作是最影响效率的。平均下来,能够成功融合成胚胎的比例大约为20%-30%,约10%在电容和之后不久发生胞质萎缩死亡,剩下的大部分卵母细胞与体细胞的复合物不融合(即使相互接触的很好)。我在文献上又看到融合率能达到79%-80%的,在这里想问问各位老师我的融合率低的原因,我的实验的具体参数如下:, o/ Z5 `: a& t- A6 x' O) P
融合仪:BTX$ G6 K* x, M- S9 l! i# l, Q" V
融合参数:1.2kv/cm 30μs/次 连续2次脉冲
& u8 p5 _+ Q, X 融合液成份:甘露醇 0.27mM4 Q- T6 z4 J" F) S. a
CaCl2 0.1mM
$ `# K; T% T, ]0 b% v3 { MgCl2 0.1mM
7 l" r, S; @# E Hepes 0.5mM$ c8 R: b9 _ o4 e: _- ]
PVA 0.01%$ j9 u+ I4 P9 r+ i2 E* p
. y8 j* x3 W4 r7 P+ z7 g ]
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