DC细胞的培养方案和流式检测？

yubin083

semi-mature及mature DC是不容易贴壁的，如果换液将损失细胞。你可以将换下的液体离心，取沉淀resuspended，再进行检测，你会发现里面绝大多数是DC

hwlightning

回复 yubin083 的帖子; p, y( t1 N& o
- x+ x4 U9 [- c* [5 _3 z
是不是成熟的DC细胞是悬浮的细胞，
2 p9 ~; l, f! w. N* f" ~我最近看我养的DC有很多悬浮的，和贴壁的，如果我半量换液的话会不会损失掉很多细胞？* |  z; b4 @) p9 }4 y* p

yubin083

诚然，从人体血液中培养获取获取DC亦然成为不少researcher的研究方法，我仅仅想了解依靠这种方法获得的DC的纯度到底有多少（排除淋巴细胞后），其表面CD表达的情况？

yubin083

关于血液中单核细胞的分化为Mφ和DC6 j/ B) ]6 {) M8 B4 M, E9 z/ z
这种关于这种DC（表面CD1+，CD11b+，CD14+/-）国际上是有争议的，至少已故ralph steinman教授就不认可

yubin083

回复 hwlightning 的帖子. F# _- h: F* E: j! w

  Q# n4 e9 {2 P, h样子有树突，不一定是DC，有一部分可能是巨噬细胞，这种细胞有小突起，而且贴壁，比DC还牢靠

透明之蓝

3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时& v, X$ E) R" ]9 a  I4 r
4、弃掉含非贴壁细胞的培养基# M) ~4 D1 J% J* N

( o- r1 ~" c# J1 {2 [" w弃掉培养基要注意，格外小心，轻轻操作！！要不细胞会损失很多！！6 ?5 V/ W; f! N! t; J3 F/ I  a% o
关于其它问题，同问！！

hwlightning

回复 yubin083 的帖子8 L$ {: t2 I) h8 R. {, Z" p
% I8 F& T, c) b; ]$ i9 Z
我今天看细胞的时候发现有很多贴壁的细胞，但是贴壁的细胞也有很多树突状。

yubin083

想问下这样培养出来的细胞中有macrophage吗？如果有，大概有多少比例？

flowguo

        以前养过，看步骤应该差不多，细胞因子浓度具体记不清了，不过很多文献上都有诱导方案，一般没有什么问题。我觉得单核诱导DC经常会混有很多淋巴细胞，贴壁后最好洗干净一点。
( m. T3 E8 b$ H/ D     以前都是200ml的血，诱导一个星期不出问题的话1X10^7没问题，纯度能有80-90%，多多少少还是会有淋巴细胞。不过时好时坏，有时候也很差，都不知道什么原因。
0 p1 B+ S# U& m9 f3 f. h     表型鉴定我觉得你不一定每次都做吧，养多了有感觉的，树突的形态很典型，真要要求高的可以挑选着做，流式多标的话也要不了多少细胞。
3 k1 t8 i* Z9 a5 q3 }9 z) d      临床试验不是很了解，同问。

flowguo

        以前养过，看步骤应该差不多，细胞因子浓度具体记不清了，不过很多文献上都有诱导方案，一般没有什么问题。我觉得单核诱导DC经常会混有很多淋巴细胞，贴壁后最好洗干净一点。' u( _( _9 Q+ B& Y; ~5 f
     以前都是200ml的血，诱导一个星期不出问题的话1X10^7没问题，纯度能有80-90%，多多少少还是会有淋巴细胞。不过时好时坏，有时候也很差，都不知道什么原因。
  V! A& u% [% n& Q. P     表型鉴定我觉得你不一定每次都做吧，养多了有感觉的，树突的形态很典型，真要要求高的可以挑选着做，流式多标的话也要不了多少细胞。% u: N" ]1 {2 {
      临床试验不是很了解，同问。