请教，为什么我用碱裂解法大提的质粒电泳只有两条带？

yuhaoze

今天用碱裂解法大提的质粒，跑电泳出来了两条带，想问一下，正常情况下不是三条带吗？
) ^% w4 z! x) B7 a" {8 Z5 f在就是A260/A280=2.3,会影响转染效率吗？

碧落

据说，比较好的情况是三条带，一般两条带也就是可以的了。

xulijunji

我做的时候两条或者三天都表明比较纯的，至于转染。。。没做过，不过我当时做转化没问题的

yuhaoze

回复 xulijunji 的帖子. W; p# `: r1 N- V. d! k+ t) P

: G0 C( p! p5 T' b" v做转化对质粒的要求可能比转染要低一些...

weiyepan

做得最好的是一条带——都是超螺旋。。。你跑的这带型有点奇怪，建议做个酶切看看。

sanna1

没切的质粒跑出来的电泳图不是一条带吗？为什么会有两条，三条的问题?
9 q+ B* e; Z/ G5 P6 L能解释一下吗？

rexhz

做转染最好用试剂盒提，而且是去内毒素的那种。手提里面有很多RNA

86964109

回复 sanna1 的帖子' Q1 r" S' `8 o7 O* s$ {7 U2 e* l$ k

8 O! l* }0 T( m因为有超螺旋，线性、和缺刻3种质粒形式，他们的电泳速度不一样，线性跑得最慢好像，$ G$ {/ s0 Y$ b" }
所以...
, a# ]& w6 v# C! S& P) A( @8 Y% n  i
补充内容 (2012-10-25 08:09):
8 m% ]" z; k) J8 x7 d/ X1 H如果是瞬转,建议环形质粒转染,因为环形质粒更容易进入细胞,这样可以提高转染后阳性率.
; H9 b, }! A# ^" M. v* K* d8 s有人说的：如果是挑稳转,建议线性化以后转,因为稳转不要求转染效率,线性化的质粒更容易整合到细胞的基因组中,这样可以提高克隆

zxcv12345

回复 yuhaoze 的帖子! \9 @# |# K- C( k3 I" ]6 o
  k$ A- [; L3 |0 G+ |
转染纯度要求高，最好要用试剂盒提取质粒; f' D" ?, H1 f8 C& B- O5 X
提取后的最好为超螺旋，也就是一条带

yuhaoze

回复 86964109 的帖子) ]* ?' R: f2 n: t

4 ?, e5 x% @7 V  W* @) L碱裂解法提不出线性的DNA