关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：
; p: v# |6 r& U1 Z9 z$ ?5 v1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
1 @! Q1 o( k4 ]7 b2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
- q( Z- R4 ]1 r* Q5 c4 Q* D求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞
! O: X4 i4 h  p  |' }           2细胞低渗处理方法如何优化？; w* g# X5 D6 L* z- M( T2 h! [
谢谢各位i！

SKC-SFC

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素' Y# _: `3 H2 K% k
2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。* T7 L: O9 a+ W( Q* y, ~" }
我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

SKC-SFC

回复 xbs530515 的帖子2 v: d4 g* e, K' A6 c
9 o5 A* D$ X: _5 N3 `' [4 ^, ^
嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子* w; T- p0 U$ ]8 W

7 Z( S4 ?7 ~' a) [) X4 L     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子6 p8 P; J" _4 s5 I
$ k; u# p3 o3 H' U! c, O3 H( H
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子; A- e& I& `: S5 L+ a1 g

* O5 h: a" H( f4 o% d7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊
# ^2 {8 v( X3 X9 L- c' z
$ ?1 ^# C6 F, Z- G- E4 ^这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

回复 突击兵之小土豆 的帖子5 W, Z7 U( G4 ~3 j$ w

  i  H0 h: |$ L/ s* ]$ u; q70CM   打错了   

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& ^2 U0 @! D) w: X' E; t70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧