[求助]小鼠胚胎干细胞体外定向诱导技术求助

summer0914

实验室刚刚开始做胚胎干细胞不久，实验技术不成熟，想要使其定向分化为心肌细胞，按照文献中找来的方法实验，发现很多问题，求助各位站友帮帮忙。
' S0 K2 p& W6 e+ n" l+ @: U1. 悬浮形成的拟胚体状况好像还行，但是转进板里贴壁时就有问题了。有的不贴壁，有的贴壁后基本不铺展，铺展开的2-3天就开始碎裂凋亡，差不多到5-6天就中空了。
9 i& l$ H8 C7 h3 P4 {2. 拟胚体贴壁培养大家都用多大的孔板？6？24？还是96？每孔里面放多少个呢？这个有什么影响吗？
% k' c- ^2 @8 C, I+ X8 n3. 我们实验室培养基用的是GMEM粉剂调PH的，发现每次调完PH用不了多久培养基就开始变色加深变成枚红色，相应PH也会升高，请问用这个的站友们的培养基也这样吗？
4 Y3 _( R. R! U+ Q$ V$ ?

summer0914

有没有哪位站友肯帮忙呀~~

细胞海洋

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周末 再耐心等待一下

summer0914

回复 细胞海洋 的帖子! u8 s3 Y" [) e1 f$ c$ p( P. k

5 ~3 {& @- u" V$ s$ |- y谢谢版主！

summer0914

这是我悬滴出来的拟胚体，请大家帮忙看看

cxscxs

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1 i* A, g* W( E" S  C8 _6 g& ]3 P0 r! w
好漂亮的球啊~

yedanna

回复 summer0914 的帖子& t4 [+ U4 n" {3 [4 p& s
3 [  _( h8 B  V9 Y( t3 r% `6 Y
你的拟胚体形态看起来还不错的。转到板里培养的时候，前面2天最好没碰，否则影响贴壁。我用的4孔板培养，每个孔放3-4个拟胚体。拟胚体的数量会影响其贴壁。培养基的PH问题不大，我们实验室很少测PH的，粉剂溶解后过滤，直接用了。

summer0914

回复 yedanna 的帖子6 D' g, N8 N8 a5 R* a; ~4 l

5 S- C' M( m0 o# s. D  C& \# ]您的意思是转板前两天最好不动不换液是吗？之前有用24孔板，放2-3个EBs，是不是放多了？
& `6 v: t6 J! p) h% }5 [" W1 `/ l' m
还有一件事让我相当郁闷。。我看文献好像胚胎干细胞向心肌细胞分化是比较容易的实验，貌似大家很容易就能做出搏动的心肌细胞，可是我前后做了两个多月，虽说不长，但是遇到了各种问题，实验进展超级慢，有点费解到底是哪里出了问题，请您指点一下出现类似状况应该怎么办啊，我刚读研，初次遇到这些状况，谢谢您啦

summer0914

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1 E5 |5 \. b3 X: W谢谢哦~ 可是就是不跳哇~

summer0914

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还有就是EBs凋亡的特别快，不知可能是什么原因造成的？