[求助]小鼠胚胎干细胞体外定向诱导技术求助

summer0914

实验室刚刚开始做胚胎干细胞不久，实验技术不成熟，想要使其定向分化为心肌细胞，按照文献中找来的方法实验，发现很多问题，求助各位站友帮帮忙。
2 y! a- Q: I$ p0 k% @) I. p1. 悬浮形成的拟胚体状况好像还行，但是转进板里贴壁时就有问题了。有的不贴壁，有的贴壁后基本不铺展，铺展开的2-3天就开始碎裂凋亡，差不多到5-6天就中空了。) g# E  S# h! e$ z$ E6 h5 W
2. 拟胚体贴壁培养大家都用多大的孔板？6？24？还是96？每孔里面放多少个呢？这个有什么影响吗？
; `6 O- t3 Y3 J7 ?- m3 C3. 我们实验室培养基用的是GMEM粉剂调PH的，发现每次调完PH用不了多久培养基就开始变色加深变成枚红色，相应PH也会升高，请问用这个的站友们的培养基也这样吗？! Q' D! A. }- |) g; S

summer0914

有没有哪位站友肯帮忙呀~~

细胞海洋

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8 o' i3 s. M. O. r
9 d0 g& F% B0 l$ b1 L% s周末 再耐心等待一下

summer0914

回复 细胞海洋 的帖子4 H5 q/ i/ _8 N# V6 N

# ~2 {4 k9 w# C1 p谢谢版主！

summer0914

这是我悬滴出来的拟胚体，请大家帮忙看看

cxscxs

回复 summer0914 的帖子1 ]4 b3 C3 }9 [- S& O! j; f8 G. A2 ~

2 \; q$ [8 W+ {6 w5 o好漂亮的球啊~

yedanna

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2 j5 @6 Q+ z- E8 R) P4 T! _3 Z  r, `" t0 c
你的拟胚体形态看起来还不错的。转到板里培养的时候，前面2天最好没碰，否则影响贴壁。我用的4孔板培养，每个孔放3-4个拟胚体。拟胚体的数量会影响其贴壁。培养基的PH问题不大，我们实验室很少测PH的，粉剂溶解后过滤，直接用了。

summer0914

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- Z0 t% d; K8 T3 M
" Z# N, f9 y2 U" N1 p您的意思是转板前两天最好不动不换液是吗？之前有用24孔板，放2-3个EBs，是不是放多了？
+ w6 a8 j( x& K. s' i2 @& s7 B
; k. a; r9 _+ R& s) m  n4 ~还有一件事让我相当郁闷。。我看文献好像胚胎干细胞向心肌细胞分化是比较容易的实验，貌似大家很容易就能做出搏动的心肌细胞，可是我前后做了两个多月，虽说不长，但是遇到了各种问题，实验进展超级慢，有点费解到底是哪里出了问题，请您指点一下出现类似状况应该怎么办啊，我刚读研，初次遇到这些状况，谢谢您啦

summer0914

回复 cxscxs 的帖子) n  K+ S9 F* v
2 s8 z' r( Y2 s  I7 S$ r6 q
谢谢哦~ 可是就是不跳哇~

summer0914

回复 yedanna 的帖子1 m/ [  D0 `6 F5 u

  ^1 s- I+ Q6 H6 K+ d$ _$ j/ i还有就是EBs凋亡的特别快，不知可能是什么原因造成的？