MSC这种状态如何预防及处理

wbs1986

最近养人骨髓MSC，原代形态还可以，第一及第二代就出现很多黑色颗粒，然后细胞过几天就死了，不知道是不是传说中的黑胶虫。出现这种情况应该怎么处理，如果只能丢弃的话，那这种应该怎么预防，最近已经连续出现四五批了。无菌操作应该没什么问题，培养液用的是低糖DMEM加10%GIBCO胎牛血清和1%双抗，请各位大神多提建议。

细胞海洋

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wbs1986

原代细胞

wbs1986

最近做了空培养，发现有孔板里也有脏的东西，不知道这个会不会影响细胞状态。另外原代细胞培养时我发现也有细胞胞体发白的情况，是不是我的细胞原代就状态不好了，谢谢大家的建议！

wbs1986

回复 cactus006 的帖子2 v1 @. b6 \% U4 J) n$ B
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非常感谢你的建议，我想培养基可能是一方面原因，这几天我用空培养发现培养基在孔板里好像也比较脏。以前如果出现一瓶细胞状态不好，黑色颗粒增加，其他状态好的细胞不会受影响。而现在一些好的细胞也会跟着变差，像是会传染，如果不是污染的话应该是共用的培养基及操作问题了。但是以前用相同的培养基，FBS都没有像现在这么严重过。下一次把GIBCO血清换成Hyclone的试试。

cactus006

回复 wbs1986 的帖子+ C$ j2 n. h: t# c
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毕竟没有在镜下看到细胞，根据图片给出以下几点建议：4 C3 B  z) ^2 n( Y. @: D9 l
1、如果好几批细胞都出现这种情况的话，考虑是不是你用的培养基出的问题，比如是不是FBS，可能是不是黑胶虫之类的，虽然到目前为止不确定黑胶虫是什么（没有鉴定方法），但是建议换一批血清或者添加剂等，还有整个实验室要重新消毒，灭菌，重新开始做。
9 s+ ?2 O$ T( g/ ]# c" X1 g2、细胞状态不好，所以还是建议重新调整培养体系，规范实验操作。
( \) o; }5 `* l9 }3、保证取材，实验操作，试剂耗材等整个实验过程无菌，严格规范质量控制体系

cartoonyang

回复 wbs1986 的帖子
! P  e9 Y) q! s  N- \6 ], `7 ]1 j2 M) U
Gentamicin, 10 mg/ml (Invitrogen, Cat.no.: 15710-049)，我们用的是这个。

sdyinong

回复 安lisha 的帖子- x6 X* w( S! k

) X: X+ _+ s9 K  o+ Q/ u一般1传4即可，差不多的10e6，如果细胞生长的慢的话可以增加细胞的数目

细胞海洋

回复 杨磊1 的帖子% t: R  g, `% t' i
( R, R* ?8 {2 h! N% a8 v6 a
http://www.stemcell8.cn/search.p ... mp;searchsubmit=yes

杨磊1

各位大侠 请问怎么去鉴别黑胶虫污染啊   实验室诊断  还是显微镜观察啊