求助：CIK细胞培养

immyouyou

我培养人外周血的CIK细胞在第5天1瓶传2瓶扩增后，集落就紧紧地贴在壁上，而且周围有很多梭形或长长的细胞，晃晃培养瓶也很难漂起来，再继续培养下去，往往集落就会越来越少，细胞变得越来越大，感觉很杂乱，请教一下，怎么回事？2 ?- X4 R6 U7 \2 r& Q5 H  `2 J% V) B
是培养基的量多了还是少了？4 h* f( g+ q/ o5 b$ ?0 i
血清浓度10%，可以吗？- v) z# o" j" N0 K! |8 ~' _$ r
IL-2 1500U/ML  IFN-r  1500U/ML,浓度大了还是小了？# ^% m/ B0 c5 E- }% Q. c9 o7 X
谢谢！

lyj-0017

回复 kiss2346 的帖子" ^; d0 w" ?# s6 P% t

+ P  P8 d, ~' k5 \( s: x( {# F你认为转袋之后应该多长时间加一次培养基呢？按照什么标准加液呢？

硕果累累_555

无血清培养CIK细胞比较好，CIK呈悬浮生长，在瓶中培养时如果倒置培养，其中的成纤维细胞容易成贴壁生长，而淋巴细胞回呈悬浮样生长，还有很多混杂细胞，所以很混乱。 你用血清培养的话，血清会诱导细胞贴壁的，所以很混乱的。建议无血清培养CIK细胞。

chenguangyu

细胞因子浓度高了，血清浓度也高，建议用无血清培养基

flys100

第一因子浓度大了。
6 D, }3 }8 T, F& g9 |" P# S第二至于培养基多少嘛，不知道你的初始细胞浓度怎么样，不敢说。* ]- |/ o6 e$ O0 G9 V; M' l4 c
讲下个人操作吧：INF 1000U   IL-2 1000U，IL-1 100U，抗CD3 50ug，
1 L) }' t# U& s6 b100ML开始，3天后补液，以后流程几乎都一样，至于你说的5天扩瓶，
8 o9 B/ g* [+ |( g% @$ L; A细胞密度也是一块，细胞密度过大也不行，这个自己多看多对比吧。

echono

第一直观感觉培养不好的主要原因出在患者的身体状况

sunny.yc

回复 bloodroses 的帖子
* s7 C; `1 G7 @$ O, S
, i0 W6 ^" W! k. i; q十分感谢，那你们数量是3X10^6，那是多少体积呢，我觉得你的细胞养得很好

bloodroses

回复 sunny.yc 的帖子) K/ l! I: d( e" ^1 h( P+ s3 z! J
1 ^6 R4 y+ E+ ]0 X5 O2 m: F
接种每孔3*10^6个，2 o% i) Y7 c8 Q- C
养了14天，最终数量是7~8*10^6.

sunny.yc

回复 bloodroses 的帖子3 |9 }- w& f7 H$ t7 y
! Y' u; @4 Z2 m$ _, b  \
朋友，那你6孔板是怎么接种数量，最终数量又是多少呢，双阳50%我很欣赏呢

kiss2346

回复 immyouyou 的帖子% Y, b7 \' c0 Z* V% y& y' W

, S6 w9 {- ?& h( U2 Y观察细胞状态，确定细胞增值能力，还有个人感觉你加液频率有点低