求助：CIK细胞培养

immyouyou

我培养人外周血的CIK细胞在第5天1瓶传2瓶扩增后，集落就紧紧地贴在壁上，而且周围有很多梭形或长长的细胞，晃晃培养瓶也很难漂起来，再继续培养下去，往往集落就会越来越少，细胞变得越来越大，感觉很杂乱，请教一下，怎么回事？
' _* |9 i6 Q) j9 a& h/ G4 Q是培养基的量多了还是少了？
, _9 P% S+ m4 f* ~- S0 Q! L血清浓度10%，可以吗？
6 u: A5 k/ F& A, U5 EIL-2 1500U/ML  IFN-r  1500U/ML,浓度大了还是小了？* V8 N& Q' C1 W& }$ ?
谢谢！

lyj-0017

回复 kiss2346 的帖子1 _9 b. _% V6 Q( l

  k, ?6 \, k8 ]1 z* }! e! h你认为转袋之后应该多长时间加一次培养基呢？按照什么标准加液呢？

硕果累累_555

无血清培养CIK细胞比较好，CIK呈悬浮生长，在瓶中培养时如果倒置培养，其中的成纤维细胞容易成贴壁生长，而淋巴细胞回呈悬浮样生长，还有很多混杂细胞，所以很混乱。 你用血清培养的话，血清会诱导细胞贴壁的，所以很混乱的。建议无血清培养CIK细胞。

chenguangyu

细胞因子浓度高了，血清浓度也高，建议用无血清培养基

flys100

第一因子浓度大了。# I( O5 @. e4 h1 G1 F8 U+ |
第二至于培养基多少嘛，不知道你的初始细胞浓度怎么样，不敢说。
, z0 ^+ {' i# A! U讲下个人操作吧：INF 1000U   IL-2 1000U，IL-1 100U，抗CD3 50ug，
# I" y/ K. Y  s100ML开始，3天后补液，以后流程几乎都一样，至于你说的5天扩瓶，
. f4 l2 l- R1 T& g9 _' n细胞密度也是一块，细胞密度过大也不行，这个自己多看多对比吧。

echono

第一直观感觉培养不好的主要原因出在患者的身体状况

sunny.yc

回复 bloodroses 的帖子
: ~) u) z( g5 T9 V, Z8 R2 Q0 G. t# B
十分感谢，那你们数量是3X10^6，那是多少体积呢，我觉得你的细胞养得很好

bloodroses

回复 sunny.yc 的帖子$ X3 e- L$ |0 g, h2 I" x
. g9 x; G: Y4 D9 S9 W  ?5 P
接种每孔3*10^6个，
1 x: e. Y5 Z) B" A% Q% v9 o. U养了14天，最终数量是7~8*10^6.

sunny.yc

回复 bloodroses 的帖子3 G8 ^. l; Z' a# S. M4 l. T
  w2 Q, }% v. Y
朋友，那你6孔板是怎么接种数量，最终数量又是多少呢，双阳50%我很欣赏呢

kiss2346

回复 immyouyou 的帖子
* P+ @( ^9 S. \# x+ ]
+ |, j+ a4 |* z  x' z! b: V% H观察细胞状态，确定细胞增值能力，还有个人感觉你加液频率有点低