病毒感染细胞问题

huangcong1988

收集病毒以后，用100KD浓缩柱子浓缩，大概能浓缩10~15倍，一般就是15ml病毒上清能浓缩到1~1.5ml，浓缩后的病毒感染成纤维细胞发现，在4×的荧光视野下完全看不到荧光，但在10×视野下能看到微弱荧光，我是用的六孔板，一个孔里面加300μl浓缩后的病毒夜，为什么感染效率这么低？我还加了polybrene，浓度为10μg每ml。病毒滴度应该不很低啊，因为当时收集完病毒之后，照过荧光，很亮。感染过293T，也还是比较亮。为什么感染成纤维就不亮呢？

varing

感染原代细胞本来就比较难。我现在也是这个问题，48小时后在20×的视野下才能看到荧光，293太容易感染了。我的没浓缩，很大的原因是病毒滴度不够，也可能是MEF状态不好。我打算把细胞铺稀点，然后多次感染来克服。

yueweilei

呃，想问下用的什么病毒啊？用来做iPS？
! `. d2 y1 X* w& _

huangcong1988

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0 J% i6 `5 I5 |. l" N( w) v; J% z4 }0 f. W& {; d) f  j8 a* _. }
滴度不够的话，浓缩了啊，用浓缩柱浓缩了，浓缩后的病毒，加的量还不少，再感染，结果也还是不好

huangcong1988

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1 G. v& _" S# @9 y9 x" S0 V6 D3 H, U6 B$ d4 E
恩，是的，慢病毒

yueweilei

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( O2 C' k$ x7 N6 \5 S- Q5 Y
8 t: a; o* L$ P0 j1 F" A' P哦。我们用的逆转录病毒。不过，慢病毒好像可以通过高速离心1h-2h，进行浓缩。

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子! Y% O9 ^- b' d& C! G& c7 a& U
: D# f1 K# p5 G, j
逆转录病毒系统我也有一套，不过逆转录病毒的没带荧光，只有一个control。我用柱子浓缩，你逆转录病毒感染效果怎么样呢？

yueweilei

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5 V, E/ F! z" P( w8 o, z
6 u0 P3 U: m# p; v; \0 D4 y! y我用12孔板做，每个孔一般能有二十个左右的ips克隆形成，应该还行吧！

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子3 Q4 M  ?* _) r; L1 u  T

( ?. p& C4 ]- A% J1 F  F多久形成colony？还有你病毒加入量是多少？

yueweilei

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8 {7 x' w! K+ i0 N7 H: t9 E+ t2 O9 Q2 q
没测滴度啊，不知道具体是多少。四因子的话大概十几天吧。