电转试剂盒LONZA以及电转细胞与质粒比

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求问LONZA电转试剂盒全名，用于电转角质细胞的用哪一个？电转仪参数？
2 I1 C1 J2 v* K( [+ |' G6 o另外电转的时候细胞和质粒的比例大概多少合适？看之前论坛里发的“细胞和质粒的比例我用过30ug-80ug：106-107”这个是100万的细胞用30ug的质粒吗？

oooet

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4 H, p) K6 a7 g& a: w
3 r% c/ }# ^, E5 Y) L" }" z加我qq吧  1270050018，不知道我的电转程序是不是能用于你的实验

云下的风筝

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$ t: ~2 o, ^6 k3 m& C% p! U
# o5 I# D$ G# H8 s您好，genedu，请问您是否有用过Lonza的试剂盒电转过T细胞，这块经验空白，买了个试剂盒，电转了好几次，活细胞就10%:L

wzm123hzy

前辈您好，我最近想用Lonzad 4D X-unit 电转仪转染脂肪干细胞。之前没有用过电转仪，想向您我请教一下：您们用的电转缓冲液是专门从Lonza 官网上购买的吗？还是直接用opti-MEM呢？打扰您了，谢谢。

genedu

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8 y, m# O% I* H2 ?" r) W8 c/ G
, o) I5 ^9 N0 C, h$ q5 q& G: v8 v* M是一些细胞碎片之类的东西，有可能你还得多摸索几个转染程序

royltc

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: R! w5 d; M6 p# D8 c# p8 U) h# P" ~, d8 ?" d, E7 y
你好，我用solution T转染的cho-k1 ，转染之后培养基中就有黑黑的点状或者片状的东西，细胞死亡也差不多一半的样子，请问那些黑黑的东西是什么啊？

缥飘实验员

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: b! i" U2 ]' _- y
' W% r4 m3 G( @  G% Y. m4 L/ a前辈好，请问有没有做过 H1和 H9 的电转，现在使用 lonza NucleofectorTM 2b device 仪器，0.22的杯子，细胞100万个，100ul体系。使用 A-023程序， 现在做了GFP  2ug、7ug 的电转实验，连 GFP 都没有转进去，零星的看见几个细胞。
# o  U) D+ q" T  J" ]6 ^8 y1、转后接种到一孔六孔板上，细胞贴壁率很低不足20%，或者更严格的说只有10%，这个主要原因是细胞状态吗，还是操作有问题？对于这样需要融合度为多少合适，60%？80%，大概需要生长几天？还是电转前一天高密度接种第二天消化电转。消化我发现使用 TrypLE酶不容易吹打为单细胞，是不是 accutase 更好些？
5 Q( L; O0 r7 T4 g2、电转液为一般的盐溶液，是这边的实验室的 protocol，具体配置不知道，转别的细胞是没有问题的。使用 bio-rad 的仪器用 PBS 作为电转液，效率也挺好的。这个是不是需要自己摸索，有钱直接买kit 是不是更好？$ _9 J- [4 Z5 Y; m/ D
3、现在处于预实验，摸索条件做细胞梯度好还是质粒梯度更好？) Y. T1 j( T4 M, e0 o
4、电转实验细节上有没有特别好的建议希望分享一下，2 {+ D* {3 W. i1 Y- Q" }2 \7 @
! m2 ^6 _1 [* A* E5 V
说的有点乱，还请不介意，期待您的回复

canyon

Jonathan 发表于 2014-3-13 14:27
$ C4 F9 B5 j  I1 w+ S+ ~回复 sirius_zou 的帖子: `7 s: i/ |6 i8 j- W, m! {
3 `$ M/ \8 ~1 Z: {( e
我用了6ug。1m的CD34+cell。完全没问题。细胞会死一些。ips出的杠杠的

9 T8 i2 F' g7 _4 j6 T
Jonathan, 你的CD34+细胞的分离一般需要多少ml血液？

genedu

回复 刘金莹 的帖子
5 M( H+ x/ _8 u
# |; h' p& x% p0 Y  A; C  }( K真是对不起，真没电转过神经干，不过电转程序可以参考lonza网站

刘金莹

回复 genedu 的帖子5 V$ u, @% `5 t9 G3 O

* C" |( A0 M/ ?1 l7 V$ [5 d4 P请问  您做过神经干细胞的电转吗？ lipo2000的效率在1%左右