求助：小白求教IPS的各种鉴定方法

whether

烦请各位大虾详细说明

frankieisme

回复 whether 的帖子. M5 S- E$ ~' m; s+ p6 f3 q6 S6 G
/ D4 O3 ]$ o* T
iPSC的鉴定：核型、基因表达、体外分化能力、体内多能性检测等多方面.

supercell

这是最早最经典的nature protocol，供参考。

whether

我自己总结了一下 大家看有什么问题' }$ X4 j& |9 Y8 p+ s; U  U9 i
; F8 y- H7 ^0 \6 k$ E4 D+ E: u; h+ _
yamanaka 筛选因子时使用的方法：在Fbx15敲除鼠的基因组内，Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中，内源的Fbx15 启动子关闭，neo不能表达，细胞在G418药物处理下会死亡；在圆形的多能干细胞中，Fbx15 启动子会启动neo，细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒，如果能够被重编程成多能干细胞（iPS），就能逃过G418的选择压力，增殖形成细胞克隆
$ C# I* N: ?9 g. B
! j% @7 X2 b; v, i$ Y其他鉴定方法
' Q0 z' y. `) h1 k1.Bisulfite Genomic Sequencing 8 g* D3 t# b4 R! x; Q1 A0 Y7 r
亚硫酸氢钠基因组测序，分析iPS细胞中的去甲基化，保持甲基化状态2 d2 V# p' x; o
+ Q# p$ j2 N2 H! k
2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR
& t* n7 r2 {2 W; R; D* W8 s分析染色体组型与简单序列长度多态性（被称为第二代DNA）" p7 q# s0 G; k* |! Z" [0 I8 V

% Q2 ^  B& c. w" S; J3.Western Blot Analyses
) D7 H  w) `& O! ~通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达/ Z+ v. L# E4 x0 k

! P4 s+ I0 Y5 f4 H4.RT-PCR for Marker Genes : W- v0 |, q; {/ k3 S4 r* K
检测干性基因表达' c  i6 j" |, y) P- X! ^% Q/ d4 ^

4 x1 M% r: T( h  |& T1 C5.DNA Microarray
9 X0 g% F7 }) M3 j# W基因芯片。。。3 l; P# A( C+ A+ V: G

+ ]& g* s+ j5 G7 c$ F3 D6.In Vitro Differentiation of iPS Cells - y8 h' C; s2 v
体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后，肿瘤分化出多种组织$ |1 y/ m9 x# s( y2 Y

chunlanchen

GIBH干细胞实验室所用的方法是：
# Z) A7 c) Y+ F# x1、插入鉴定：观察iPS是否插入了四因子
) D* V( k& f5 L# q2、核型鉴定
$ u' n2 V+ J; K- |3、Realtime PCR 检测iPS外源基因沉默及多能性基因的表达水平* p  P* Z8 h9 D1 O  H
4、免疫荧光鉴定胚胎干细胞标志物在蛋白水平的表达. e7 k2 t9 a4 {/ x7 n" ?
5、双硫测序方法鉴定多能性基因启动子甲基化水平' \  \: R0 K) {7 O5 P% A$ }
6、皮下注射畸胎瘤
4 L1 a- `% B% B4 `* u7、嵌合体注射鉴定分化潜能