CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

lyj-0017

CIK细胞起始阶段生长良好，细胞集落较多，但是在加液之后，细胞集落变大，并且聚团较大且有部分集落贴壁，后续培养过程中便会发现培养袋中出现絮状物，以至于后续培养过程中一直存在絮状物，细胞也死亡较多，不知道大家有没有遇到过这种情况？是我加液的问题还是别的什么原因导致的呢？

jenvy121

回复 lyj-0017 的帖子' ]; }; g4 G6 \* d: L) [

2 Z$ T- G& n0 K& M$ Q- x4 Z直接采外周血，数量也是因人而异吧

lyj-0017

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9 S, v, T4 C( Z8 e$ A: E/ t! r
  p: F& s6 K& q1 b- p4 N7 ~4 [; S你们用的是机采吗？还是直接采外周血？现在培养一次最多能获得多少细胞呢？

jenvy121

回复 lyj-0017 的帖子# [# k" o4 Y7 R: u1 K
0 ^! w" h( i4 g2 T1 V9 s
对的，我们每次换液计算好用的培养基的量，然后预热

lyj-0017

回复 jenvy121 的帖子) b, a9 H1 U0 r6 Q# c+ t. |% [0 p, Q

2 h! ?# d0 [5 [) ?3 E培养体系得看分离得到的单个核细胞数量，根据5~10X10^5/ml的细胞密度铺袋。你后面说的预热多少没看懂，应该是问预热多少培养基吧？一般预热一瓶培养基，培养基手感不那么凉即可添加。酸碱失衡我觉得不可避免，但是不会出现太大失衡~

jenvy121

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2 s0 T. k1 Y* z& _2 y# K! i. }7 I! j0 p+ g/ ^+ v
不知你们的培养体系有多大？一般用多少预热多少，而且预热的时间也不长，不会出现很大的酸碱失衡吧

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子9 ]" x0 _: V5 b. f( i# v
/ ]3 \: L) W. b. O
可能我了解得还太少，持续加干扰素还是第一次听到，试试看吧！

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子8 O! u2 t; s( h; A4 Y" Y0 k
8 i" ]4 q7 }/ S
最近看文献看到有这么做的，D0天添加IFN-r和anti-CD3 mAb,第二天添加IL-2，后续培养以IFN-r和IL-2维持，按文献所说扩增倍数还挺高的~

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子) H6 }! N( C; o6 M7 F$ E* P6 l
! G# R/ D- t4 i0 M) G& d
建议还是分开加，挺多文献都有这样的描述，而且理论看起来都很合理的
9 k' u9 i3 Y; ?
8 L* ^6 G& g4 ]* H" L* A如果你还是在纠结的话，建议你连续做几个平行实验看看，可能对于你的培养体系来说，D0加一种或加三种影响不大呢

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子8 }8 [( }- k4 J7 ~1 M. L! t5 P  d9 r
' V$ z4 s& ~7 V/ x; E2 d. i5 {
记错了，IFN-r应该是1000U/ml。现在纠结的问题就是到底可不可以D0天三种细胞因子同时加？与传统工艺效果哪个更好一些。。。