肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性

412159616

无血清培养的悬浮肿瘤干细胞，能看到细胞的扩增。细胞照片如图：8 l8 ]+ J% w2 H3 {
0 ^+ ~6 S- K' f, k3 S) l. n6 [
- s$ O  W/ F; A+ h5 B
9 L5 U* s  V) e5 M: ?
但是用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色，细胞数量没办法计算。上机做流式，细胞状态也都不好。
% W! @9 M2 U. `
) N1 o8 n) F5 O, P请教大神两个问题，  X, `5 b6 h9 T5 D
1. 悬浮的细胞球怎么能消化成为单个细胞？$ r, R- [6 a/ a2 ]" e: {6 _+ O  S
2. 悬浮培养细胞状态是否都不是很好，像我遇到的问题，应该如何解决呢？( L' p* `/ E, e0 Z2 D+ i3 B- ]

wuzhouying2132

我觉得你的细胞已经都死掉了，或者已经开始死掉了，因为(用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色)。( }& w, R! h! m8 p
悬浮培养可以很好，只是不知道你的问题出在哪里？我做的细胞球只是用tip轻轻吹打就可以开，但如果要做facs的话，会在加完抗体之后用filter过滤一下

412159616

回复 wuzhouying2132 的帖子9 i$ H# r+ m: J3 g
' l, R( T; n* u0 H- X6 J
可是细胞的扩增速度都还是不错的，这又是为什么呢？

yuanshenyewu

用小皿，直接镜下计数，应该也可以数的清啊9 |  l3 \. @& G& w
？或者CCK-8看他的增值能力？

luyue6453

回复 412159616 的帖子6 x* s5 n, n6 L0 |3 Z' Z
' b; m9 R% v! V
正常悬浮的细胞球，你摇晃几下就会分开，过一段时间有聚集，你要不要弄散了后就加快速度做后续试验？再者看您的细胞长的也不是很好，尤其那个黑团感觉都要死掉了，你确定增殖速度快的细胞是你要的细胞吗？

412159616

回复 luyue6453 的帖子
  R7 t/ N/ p; b/ c: P: `$ a* W( L- }: G+ c) k" ]$ l7 Y2 W
是养一段时间，出现聚团就用胰酶消化继续养的意思吗？

luyue6453

回复 412159616 的帖子  |) z1 V4 k% t( j" u' [
% B* K( }3 b0 F
不是那个意思，总体感觉你的细胞很不正常，悬浮细胞只要聚集在一起你摇晃几下会自动分开，不需要胰酶的，

412159616

回复 luyue6453 的帖子
6 U: C0 E6 ~3 y4 X( i+ }
6 O$ v9 i  G; C7 i4 k这样子，是不是干细胞培养，初始的细胞密度最好在50000/mL以下会比较好？我还看到有建议5000以下的。

linhua188

我觉得你的细胞都死了，黑黑的，而且边缘已经破碎，还有你的细胞培养基里面污染严重！！细胞碎片很多~~细胞计数的话，多吹吹用点胰酶就好了
0 L+ _8 n: Q5 c2 f" Y% Z# k  \1 M还有不知道你怎么看细胞增值的，其实成球状态下细胞增值的不明显的
4 X4 d5 e$ z$ E, d# E# F

冷释

回复 412159616 的帖子/ }6 W  `% N. p% I
+ ]0 I& d* d/ `1 G2 W
你养的是悬浮球细胞吗？建议试一下invetrogen  StemPro® Accutase® Cell Dissociation Reagent 100 ml，我用的货号是A1110501。我用着效果不错，就是有点贵了，100ml 800多。我之前也用过普通的胰酶，打不成细胞悬液，多吹打几次，细胞就拉丝一样的，细胞传了一次就不活了，后来找到这个分离液。