肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性

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无血清培养的悬浮肿瘤干细胞，能看到细胞的扩增。细胞照片如图：7 |4 ]6 v8 f' C) p- V8 k

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8 `+ d6 d' ^3 i5 c但是用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色，细胞数量没办法计算。上机做流式，细胞状态也都不好。, }, K4 g* v& n" [* V

# M& x' E; z9 e2 y, t* L请教大神两个问题，% K8 h3 l" d. O( d# L
1. 悬浮的细胞球怎么能消化成为单个细胞？' A  C) M5 q8 ^  H, {1 _# B
2. 悬浮培养细胞状态是否都不是很好，像我遇到的问题，应该如何解决呢？/ ~, C$ p( U( m5 Q

wuzhouying2132

我觉得你的细胞已经都死掉了，或者已经开始死掉了，因为(用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色)。: {1 T% R8 E. {: }/ h; S& y+ M  |+ D
悬浮培养可以很好，只是不知道你的问题出在哪里？我做的细胞球只是用tip轻轻吹打就可以开，但如果要做facs的话，会在加完抗体之后用filter过滤一下

412159616

回复 wuzhouying2132 的帖子+ k( I: ]7 \" [6 B* ~  o) _

1 y/ \" A8 T0 H# ~2 f可是细胞的扩增速度都还是不错的，这又是为什么呢？

yuanshenyewu

用小皿，直接镜下计数，应该也可以数的清啊
0 l+ g) j8 h+ N+ ~! G7 K3 T？或者CCK-8看他的增值能力？

luyue6453

回复 412159616 的帖子  N2 {! b9 ~! P6 z  p

+ k. t6 A2 y9 [# B8 q2 t4 l8 j正常悬浮的细胞球，你摇晃几下就会分开，过一段时间有聚集，你要不要弄散了后就加快速度做后续试验？再者看您的细胞长的也不是很好，尤其那个黑团感觉都要死掉了，你确定增殖速度快的细胞是你要的细胞吗？

412159616

回复 luyue6453 的帖子7 D5 S' Y; v% ^
# f) w& B: e& o$ e$ l6 u; L6 a
是养一段时间，出现聚团就用胰酶消化继续养的意思吗？

luyue6453

回复 412159616 的帖子0 N7 E# q% `3 D
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不是那个意思，总体感觉你的细胞很不正常，悬浮细胞只要聚集在一起你摇晃几下会自动分开，不需要胰酶的，

412159616

回复 luyue6453 的帖子# g" N9 c2 {2 J! U

6 h  e3 A7 p4 Z6 ~" Q: z这样子，是不是干细胞培养，初始的细胞密度最好在50000/mL以下会比较好？我还看到有建议5000以下的。

linhua188

我觉得你的细胞都死了，黑黑的，而且边缘已经破碎，还有你的细胞培养基里面污染严重！！细胞碎片很多~~细胞计数的话，多吹吹用点胰酶就好了
* k8 n& d8 a2 E; T" W3 z还有不知道你怎么看细胞增值的，其实成球状态下细胞增值的不明显的
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冷释

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1 P, h; @7 I; o0 }, L. c' x) b+ Z& d, J! R. a$ V" D  H
你养的是悬浮球细胞吗？建议试一下invetrogen  StemPro® Accutase® Cell Dissociation Reagent 100 ml，我用的货号是A1110501。我用着效果不错，就是有点贵了，100ml 800多。我之前也用过普通的胰酶，打不成细胞悬液，多吹打几次，细胞就拉丝一样的，细胞传了一次就不活了，后来找到这个分离液。