肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性

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无血清培养的悬浮肿瘤干细胞，能看到细胞的扩增。细胞照片如图：
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但是用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色，细胞数量没办法计算。上机做流式，细胞状态也都不好。5 j' s; w1 r5 R1 X& b
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请教大神两个问题，
9 L& ^! m) W$ j. n% k- R1. 悬浮的细胞球怎么能消化成为单个细胞？/ t3 t# b8 [  Y  S" e
2. 悬浮培养细胞状态是否都不是很好，像我遇到的问题，应该如何解决呢？
. u6 l) j$ `  o4 W) ?

wuzhouying2132

我觉得你的细胞已经都死掉了，或者已经开始死掉了，因为(用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色)。8 a+ ~. t( y$ i7 ]# s2 f4 H8 N
悬浮培养可以很好，只是不知道你的问题出在哪里？我做的细胞球只是用tip轻轻吹打就可以开，但如果要做facs的话，会在加完抗体之后用filter过滤一下

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回复 wuzhouying2132 的帖子7 N/ @' o# U' k5 Z8 Q" a( B
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可是细胞的扩增速度都还是不错的，这又是为什么呢？

yuanshenyewu

用小皿，直接镜下计数，应该也可以数的清啊+ S0 d% y. f  ]+ |+ T/ j
？或者CCK-8看他的增值能力？

luyue6453

回复 412159616 的帖子5 ?0 S' M$ M" n$ e  r4 K& o) c

& p" a- X+ f% R3 j/ {正常悬浮的细胞球，你摇晃几下就会分开，过一段时间有聚集，你要不要弄散了后就加快速度做后续试验？再者看您的细胞长的也不是很好，尤其那个黑团感觉都要死掉了，你确定增殖速度快的细胞是你要的细胞吗？

412159616

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是养一段时间，出现聚团就用胰酶消化继续养的意思吗？

luyue6453

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. h) N7 n  ~9 c: E3 u不是那个意思，总体感觉你的细胞很不正常，悬浮细胞只要聚集在一起你摇晃几下会自动分开，不需要胰酶的，

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这样子，是不是干细胞培养，初始的细胞密度最好在50000/mL以下会比较好？我还看到有建议5000以下的。

linhua188

我觉得你的细胞都死了，黑黑的，而且边缘已经破碎，还有你的细胞培养基里面污染严重！！细胞碎片很多~~细胞计数的话，多吹吹用点胰酶就好了& R% U# u6 a# H& h  k% \9 O' J- |& e" a
还有不知道你怎么看细胞增值的，其实成球状态下细胞增值的不明显的6 [5 H+ w' B7 E

冷释

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, E  Q; }+ r/ ^7 c1 L5 o; U你养的是悬浮球细胞吗？建议试一下invetrogen  StemPro® Accutase® Cell Dissociation Reagent 100 ml，我用的货号是A1110501。我用着效果不错，就是有点贵了，100ml 800多。我之前也用过普通的胰酶，打不成细胞悬液，多吹打几次，细胞就拉丝一样的，细胞传了一次就不活了，后来找到这个分离液。