免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了

请叫我晓白

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# L& B" J, n5 w# H; D1 a各位请指教一下啊. c9 K! r8 _& O& l8 w
急啊 做了好几次都做不出来
7 w5 X% W' U! E" w+ d& k我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
9 U2 H) E1 ~( ~$ H大概步骤如下：
) K  x+ B. q' R7 |8 G- ~$ M1 B脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min
" s2 W. y/ J7 }6 ~一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min' l' u7 S  v  S, C9 D" G" P5 x
DAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水
' N! U) J" x1 R! r2 Z滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒+ o  E. F$ b0 K) w0 ]* l
脱水透明。$ o) z9 L% \5 d& {& V$ O- j" j
结果很不理想啊
" `' i' s6 a7 F我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄
# k+ @! i8 a- ~  J  q% p而阳性的感觉不明显。
1 ~% g; I% w( K% f( R) i请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？7 M( M( G9 f7 @
另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？
- M: ]6 X6 Z0 ]! T  I7 s万分感谢  : W9 F/ w8 T2 [6 |6 Z( Z

flagarmy

a+b+c  避光没？ 3 C% U# z! e8 v/ _6 {; _( l* b

flagarmy

a+b+c  避光没？ ( |6 ^8 z8 ~3 v. D9 e

请叫我晓白

flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32 8 Z0 s# {' z1 Z: K
a+b+c  避光没？

# _+ ?) y+ F# w& V+ H- n5 ~& T
我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧
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runsong

一抗太高了