CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。8 S; x5 o% |: K# ^. P3 S* z. V
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
  p% D8 Z  N0 P0 G6 H, Z% k" K第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。5 o2 i$ s3 J/ O4 d3 i$ F- v
多谢拉！
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lyj-0017

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  L+ f- ~" A8 j: {, B% v" ], }1 Z% `0 [, H9 F3 J, t
是啊，我一开始测出来也不太相信这个数据，并且这个数据是培养天数较短的。
. e: l7 \, _: ^  s& O3 U  b( D另外，你说的FL2通道漏到FL1通道信号的问题也是经验之谈，我自己用软件手动分析CD56-PE单阳管的补偿时，发现CD56象限的点图发生偏移的程度不大，基本都还是维持在自己的象限内，所以说还是认为你说的CD56-PE的补偿只需微调还是正确的。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子6 M- C; \- L8 T! o

: M8 f$ g6 ]* I' p* a40%也很不错了。
0 B8 n, n+ \6 h4 I我们测到的最高的有百分之七十多，后来再也没重复出来，所以我自己也对这个值存疑了。百分之三十几的比较多。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子3 v0 N" x' O% o4 S; g9 I

5 l8 Q  R( C* z: [9 r+ i) d原来如此，恍然大悟啊，非常感谢！你们CD3CD56最高的有多少？最近做了一个达到40%多的

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子  F. x) W- X7 m+ i

8 u+ n% ~2 {; {这和CD3、CD56表达强弱无关，只是FITC和PE两种染料的特性有关。FITC荧光容易“漏”到FL2通道，而PE荧光较少“漏”到FL1通道。

lyj-0017

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' G' |9 e7 ?/ P  C+ Z3 D1 W5 n6 }9 [( o
为什么只用CD3-FITC来调节补偿呢？是因为CD56弱表达，CD56-PE跑到FL1通道的荧光少吗？

rocfield

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. G- Y3 k& C4 V2 F1 F! z, [/ C' f$ E, J: s: ?0 J& E# E
两种抗体都做过同型对照。
- p( R% G4 ^3 d# @荧光补偿主要是用CD3-FITC单标记细胞来做，理论上应该是CD3-FITC和CD56-PE分别单标细胞来做补偿，不过一般情况下用CD3-FITC单标细胞调好补偿后，CD56-PE只需要微调一下，甚至不调，补偿也基本是好的。

rocfield

回复 细胞海洋 的帖子* m1 p+ \4 E" Y- Y& }/ K
1 L% A* e5 W1 F1 l0 B% M. ?) }
谢谢

细胞海洋

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* t+ C7 Z. e$ d  Y/ K
) c7 n7 A- i3 G; \9 j9 X6 H看33楼

细胞海洋

回复 rocfield 的帖子8 D' G5 X2 G9 t* w( x- J

$ _: \% q. {# ]' F! ], A你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
' P( D7 R+ t3 u; K* ]7 h: d" h  P& h) \3 W; H- H& i6 t& E. [7 T
否则他会看不到