CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
$ Z% N2 R0 C' y0 Z1 G第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
( z9 J6 Z4 ?* P7 l1 H' E第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。* x8 H) J) ]' X2 n6 x
多谢拉！, ~4 i0 {; ]' o  W& l1 u, H$ w

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。
4 k; d% i% I2 J7 i. E1 v
- I& I" n5 w2 ~5 ?1 kCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子& n0 _7 b3 R# _" Z, Y  ~
. N3 K; o# h( f2 c
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

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+ n; U* l6 s. y: X
3 s* U+ F0 R2 ~" h现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

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4 k3 h3 p$ g1 D2 v0 m5 [; d: W/ w1 y3 \) e% z2 n4 t" w& ~$ C/ a
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

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0 I! Z7 C) ^: K( |
3 f6 r; P' p2 X4 x* U是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 8 ~5 Q( d5 g4 t; x; x
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7 ~8 z: v6 V0 e4 h1 G9 d4 r
2 B" n5 N6 W9 L' v. u$ ]" [, K1 q4 ~现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

& N: j) l* Z' c
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。( Y$ ]0 j9 {1 A; M; V

4 ~" s) c) j' M! e你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？
/ t: \; y9 h% M1 g; q. o1 k) {1 g7 s0 g) l

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子1 u& j' E9 |5 r' M# O" r1 |+ Y

6 P/ B( o0 ]- [+ i6 @1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。; o7 I* g! V  I0 M+ S
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？
" J7 d! r& G5 C* S3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
8 X5 B! g- A6 q# P3 p4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47 % o8 u! W  w7 R6 ]) F- ^" I
回复 各输己键 的帖子) M2 z7 Q4 `; M% b" K$ c/ C' n- l
- e. {. [* E( u
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

6 v/ z5 t& c2 A5 d" V对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。