坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

倒腾细胞

视野下看着很漂亮的细胞 怎么搞都消不下来 甚至大部分都没有缩成圆球状
& |9 W' }( C1 O7 t1 v/ E# g- t视野下看着觉得可以扔掉的 大部分能消下来
) o9 w# \/ F9 i0 g1 Y最后把两瓶T75消下来的 离心 重悬到T25
$ i$ L, U( R$ h  Z9 u感觉乱来了 坐观变化

hyde

原代建系的时候遇到过，消化不下来就有可能不是你想要的细胞，

buildcountry

消化的时候放在37℃烘箱里多孵育一会或许能够帮助快速消化下来

月_幻影

LZ消化的时候有没有洗净残余的培养基呢？# F0 i& ^: Q  F" D" m1 z- q
另外胰酶用前最好也复温至37℃、
2 C  |5 E$ g9 y- Y# n消化的时候也可以放入培养箱里消化，效果也很好。

fuyinsheng

我之前做的时候也发生过，有几点注意一下可能会有帮助
2 r- I0 \( j9 F1、确保胰酶浓度是该细胞的最佳消化浓度，有些细胞属于非常难消化的，如果胰酶浓度低于最佳消化浓度的话即使再长时间，在适合的温度也消化不下来，有的细胞需要0.25%甚至0.5%的胰酶。另外胰酶消化前充分清洗残留FBS，并且确保吸净所有残液，可以防止胰酶失活或被稀释。
, Q7 I6 T- M+ g7 [4 p2、胰酶在37度环境下才能发挥作用，一定要提前预热，否则加入胰酶后才放进去，短短的消化时间内胰酶都处于不活跃状态# ?7 F- F# D* l" t
3、如果想让你的细胞消化下来还能用，就把细胞消化时间控制在5min以内吧，5分钟消化不下来，用更长的时间及时消化下来了也够呛了

荷荷

回复 倒腾细胞 的帖子
4 V# u4 \% s- j6 U  \5 W
- v* y; c6 P5 s1 u不知楼主养的什么细胞，养了多久了，贴壁细胞培养时间长的话也是不容易消化的；6 L" e. {0 d6 i  M
把培养基洗干净了吗、不然会影响消化效果的；: ~# ?3 |9 g* U! k
胰酶浓度，消化温度等等都是需要注意的细节。

buildcountry

1.消化细胞前胰酶放37℃复温，以增强酶活力。) u1 b+ {/ B: ?1 |/ y3 a
2.用含EDTA的胰酶消化能力更强5 D" c8 l2 M) v4 P& V
2.倒丢培养基，并用PBS洗一次，洗干净，因为残留血清会终止胰酶的效果; \) ?& h8 X7 G. ^( o) ~
3.消化时放37℃孵育，会加快消化
" e7 N( [, }* a  m: c  q4.消化完后用含血清的培养基及时终止消化，以防细胞受损

buildcountry

1.消化细胞前胰酶放37℃复温，以增强酶活力。9 |+ O( |0 x% z5 s5 x
2.用含EDTA的胰酶消化能力更强
9 _1 N' \4 \/ P$ n% g( E  a# d/ m2.倒丢培养基，并用PBS洗一次，洗干净，因为残留血清会终止胰酶的效果
1 g4 B1 t4 a4 J+ n' o) o5 \3.消化时放37℃孵育，会加快消化
- z. |& J7 \* z% M0 Z4.消化完后用含血清的培养基及时终止消化，以防细胞受损

CELL007

消化前，用PBS或者注射液洗涤2遍，然后再加胰酶（胰酶要在37度水浴过的），然后放培养箱里，如果细胞消化下来的不多，就延长时间消化。细胞长了几天了？如果长的很密，长得时间又长的话，也是很难消化的。

fangfang2016

个人觉得：若消化不下来，可以尝试少量多次消化，但每次时间不宜过长及时加入培养基终止消化。