关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：6 D: Y* k/ R6 h3 ]  `8 @% l
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,
' ?: K3 S& w, A  X% ^4 z( U可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED6 P  G! _5 ^5 o! A8 b  l+ Z
为什么Tris的浓度不一致呢0 `! R3 r2 t7 n8 u' c  m; c
请教各位老师, \8 ?; X( K$ _* ^1 W1 B5 ?: [& H" }

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

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我写的这个是分离胶
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moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

回复 moluxingke 的帖子- u" s5 s% U3 t* |4 e# \8 \0 ^

7 {% |+ }9 _9 e/ r1 s哦，我明白，谢谢
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yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，) z& s2 h5 _/ M4 h) I* k
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个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

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) b8 p& k1 I1 H6 I. d2 ?  e% n7 y" T谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

回复 shaozi402 的帖子5 X1 w3 a4 |. j7 t* `6 E
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不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

回复 97b1 的帖子% n; @  e# C- W

7 }6 i1 C+ G) [5 S" g7 C* ?好的，谢谢( ]/ w- g# t# _/ L0 I; F