关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：2 I0 g2 g. x, c& V- p
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,
+ v/ L& r# J1 {' n, I, m可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED
  d/ O! }7 ~) U( ?2 r1 _' W* @8 R& p为什么Tris的浓度不一致呢) R, i8 B% q7 |% R* p2 q- T
请教各位老师
+ R2 u, P' A& [. g; f& o$ C, c

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

回复 qingxingruyu 的帖子  S& X2 ?/ v% ]9 S! g. A

! o; ^3 A( C4 `3 x我写的这个是分离胶
$ \. k5 B/ E/ L6 b+ V. B8 l/ F+ r$ U+ s

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

回复 moluxingke 的帖子+ `7 \1 D4 E: y; {

" u% F, U5 J) L; Y1 H哦，我明白，谢谢
& D5 n# A# N& O8 q1 v8 c

yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，
$ q& l' c' Y' C/ t9 P  b+ F1 o& A! y+ Q' k, V6 h" J% i& ]
个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

回复 yinchong42 的帖子
5 A& p0 ]& d( H( F! N! G( p& O
0 K4 m) q1 E* z谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

回复 shaozi402 的帖子. h( o7 {4 W) o% P8 v, P

2 K  j8 g" k5 k# v不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

回复 97b1 的帖子
$ w. l) F  t  |" l/ t* }
- F* v. R* O. g0 V) P好的，谢谢8 {! j% f# m0 n# g  s