如何确定嘌呤霉素的药杀浓度？

Yorkshining

   如题，载体带嘌呤霉素抗性，想用合适的嘌呤霉素筛选细胞，这个具体该如何确定啊，望有经验的战友指点。。。

懵懂干细胞

呵呵 这个浓度还是摸索下的，不过在各种基因敲除文献里面都有参考浓度的，不一定适用你就是了，仅供参考。0 L9 @7 f9 H( Q
细胞数量不一样，浓度也会变化的！ 祝你顺利

Yorkshining

回复 懵懂干细胞 的帖子! i& @& I# i& N" o" L

4 n6 `+ `$ F+ E1 |! K( ]谢谢回复 我的意思是指具体如何摸索，主要指以几天内杀死所有细胞的最小浓度为标准，看到好多的都说法不一，有的说5-7天，有的说10-14天。。。

cytobiology

建议2-10ug/ml 的浓度梯度进行尝试摸索！2 A. k% i% G2 O9 F: k

懵懂干细胞

回复 Yorkshining 的帖子
1 H8 X7 D" t' s6 I. }1 |5 Z* e6 e. V1 M4 E3 g
这是我当初的资料，在进行药物筛选过程中根据细胞数量可以在 0.5-1.0μg/ml  之间适当提高嘌呤霉素的工作浓度。
' r" q& C" d. P: Y+ X7 A为了达到更好的药物筛选效果我们在筛选过程中使用过 0.8μg/ml 和 1.0μg/ml 两个浓度的嘌呤霉素进行筛选。
4 d/ C4 k) H2 K, _电穿孔转染后，会有少量的 ES 细胞死亡。电转两天后就可以进行荧光表达情况观察，但这个时候荧光表达率大约在  10%-30%，经过一轮嘌呤霉素药物筛选后可以将荧光表达率提高到  50%-60%之间，三轮药物筛选后荧光表达率高达 90%以上。每次药物培养48h之后用新鲜培养基再培养48小时复苏下细胞对细胞的活力有好处。

Yorkshining

回复 cytobiology 的帖子5 Y0 Z) K; {. I+ P
  v  G; i% K' u# _8 e, S2 x
感谢回复，那么以几天内杀死所有细胞的最小浓度为后期试验用的浓度呢？

cytobiology

回复 Yorkshining 的帖子# ~* |, Y% Z- [8 o8 A
; J" l0 _1 n0 j# L4 z
三天左右。时间太短说明对细胞的毒性太大了，时间太长又会浪费太多自己的时间！