BMSC成软骨诱导分化

liukuantj

各位前辈，小弟正在做兔骨髓间充质干细胞成软骨分化。有几个问题想请教下有经验的前辈，希望指导。
' V3 v2 C6 t& n& F3 }1，诱导分化培养基的配制是否需要添加血清？我看国外的文献大部分都是无血清诱导，但也有人推荐使用10%浓度的FBS，不知到底该选择哪种？0 S) X2 e, s( }
2，诱导分化培养基中抗坏血酸的浓度要多高，是50ug/ml还是50mg/ml？为什么文献差别那么大？
5 N5 j, u, v, j9 @+ `5 t( i; J9 z' v! j3，文献中采用pellet法进行诱导，不知道为什么诱导后，形成的小球越来越小？最后直径只有大约0.5-1mm左右，太小了。. U3 ~  J4 t- x7 r4 d9 E
4，诱导后的小球做切片，进行甲苯胺蓝染色，和HE染色，为什么会有很多空泡？是怎么回事？
: ]- _9 |6 ^# I7 x, N% l* i5，不知有没有前辈用过V型96孔板进行诱导？根本不能形成小球呀，只是一层膜状物质,不知是何原因？
3 n" X; S: F# C& V" y1 Y2 ?还麻烦各位大神指导一下，不胜感激呀！

ytumuyangren

MSC成软诱导，诱导液中不添加血清，体系中的ITS中含有一部分的血清替代物。
' Z( t, r; T, M1 ^  `MSC成软诱导很不好做，建议买现成成熟的诱导液，方便快捷；自己配置的诱导体系不容易诱导成功；
4 X$ U4 S+ D, M1 H7 K5 p9 f$ c0 ^采用pellet法，pellet会随着诱导时间的推移慢慢增大；预祝楼主实验顺利！

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:52 & Q/ J& `, ^8 o! H
各位前辈，小弟正在做兔骨髓间充质干细胞成软骨分化。有几个问题想请教下有经验的前辈，希望指导。
. Y9 f* v6 C' g+ V9 Y1 m0 L1，诱导 ...

6 M  B7 B# y7 f' W3 d) ]/ `谢谢鼓励，想请教下，为什么我用15ml离心管做pellet法诱导，最后的小球会越来越小？