求助，原代分离羊膜上皮细胞不贴壁

听不到

求助！！！我原代分离的羊膜上皮细胞，镜下能看到很多细胞，可是！！！他死活不贴壁！！！过了3天了还不贴！！愁死了，我分离了好几次了，细胞现在能消化下很多，但是就是不贴壁，我培养液是加了10%血清的，求做过的前辈帮分析下原因。
0 X3 U5 n" k1 ^' i" R7 k# T我的protocol是：洗净羊膜后，于0.05%胰酶37度水浴消化10min后弃消化液，再用0.25%的胰酶37度水浴消化20min后，离心收集，过滤。重复消化3次后种瓶培养。也试了用0.05%的胰酶37度水浴消化20min后，离心收集，过滤。重复消化3次后种瓶培养。都能得到很多细胞，但是也都不贴壁...求助！！！7 T8 P% U4 ?( V; M

yanxm920

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求培养体系，最好能附上参考文献，一起讨论，谢谢！
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小段奥数

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2 J& ^, T6 u. N4 t" I请问你最后是怎么处理的，我也是这种情况。刚消化下来的有很多细胞，但就是不贴壁？

听不到

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9 M# @1 t# t! B6 [要用胶原铺板吗？...我是直接种的，但是不贴壁...

听不到

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8 }) m5 e+ c8 X  x我想问问你，你取得的羊膜是一层特别透明的吗？我最后取的是一层很透明的，特别薄的膜，我选了那个进行消化，贴壁了倒是，但是明显不是细胞，不知道是什么，碎碎的，我就怀疑我取得这层是不是不对。我是用载玻片把带血的一面完全给刮掉了，然后剩下一层极薄的近乎透明的膜，特别容易破

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子8 }2 _3 C% R; A. F  V$ U+ t/ z0 d
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都是这样的情况啊，是不是细胞不对，您做这个要用胶原铺板不呢？我会先用没有铺的板把间充质先贴掉，在把上清转种到胶原铺的板里，这样做对不对呢？

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子' c7 b6 G; f& C2 e
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胎儿面是指胎盘拿到以后脐带的那个面的第一层吗？我消化过那一层很薄，上面很多东西，轻轻一消化就会掉下来，但是没有细胞贴壁，是我没消化对吗？4 B) l/ Q( }* V# ?
我都要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，这一层就紧贴着绒毛，又怕细胞种类不对，特别是它还不能传代。
/ \  d1 g/ G5 t6 p, V5 w0 ?你们一般是消化的胎盘上的羊膜还是胎盘周围的羊膜也可以啊？

qiaozhong.9876

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$ w, M; e4 ~& o3 a- J我是新手，没有权限加你好友

qiaozhong.9876

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我选取的是胎盘的胎儿面侧的那层薄羊膜进行消化的，那层细胞我们称之为胎盘亚全能干细胞，不知和你的是不是同一种细胞？我不知道你的那层羊膜状态怎么样，状态好的羊膜可以消化下好多细胞，有时候能达到10的9次方，这主要取决于羊膜的质量，这是我个人的经验，有的羊膜胶质比较多不好处理，还有就是要新鲜的羊膜，不要运输时间太长。关于你细胞传代不长，我觉得原代长的好的，传代也应该没问题，不知道你这种情况只出现一次，还是都是这种情况，如果都是这种情况那就麻烦了。

coffee.cat105

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请问能不能描述一下您消化的是哪个部分的细胞，我揭了胎儿面那一侧的薄薄的很有韧性的部分消化，从来没有消化下任何一个细胞下来，间充质都没有，一直要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，可是消化下来的还是羊膜上皮吗？, u+ F3 X4 r4 w" z) X
还有我的细胞原代长的很好，很快，可是一传代就停止生长，是为什么啊？1 A/ H* z6 o) Z  {/ E