造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.
  g0 C$ e; C! t7 Q4 c6 D方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
$ j: u% H. O& W& Z不明白的地方：
% o6 K4 b1 B( {" i- i: g( \5 ?1.CD133的必要性; o6 q2 x, i8 x' s" z7 e
2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？
5 g# |( q6 ^6 a3 N# w8 W# E3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？  J+ k- J& ~/ S  ]& Z
4.我的这个实验思路无问题
. |9 h/ i3 `3 R* o求各位大侠指点，谢谢！
; @4 B/ W* c3 X4 y  T- H$ E   

nailute1985

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! b7 Z4 M0 n7 q8 L5 d你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

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8 \" Q( |- _8 |1 [5 k1 Z1 u/ o( w' a  o) O- U
我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

SKC-SFC

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5 C8 C) m7 t- x/ r' b. i
! P+ o8 ?. r4 j* B这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子9 X/ i* ~  Y) b( k5 r  {
1 ~' G& @# p/ z5 |$ W+ E" }; I
调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

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# {1 C5 n! E' N0 n
不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

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' o; G& D% ?7 ~) t& ]% D6 t- T
R1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多
  d# p( m2 Q6 d  DR4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

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0 i4 B# V, k1 o$ Z8 g' ^
0 _6 X5 d) D+ T, ?2 b# R0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

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9 x# f6 R( w/ o2 p9 l7 w
/ q4 n8 X" U. A4 ^5管没错啊

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子* B8 y( l) {/ g9 K( \2 @) a

. K& w6 L' Z) R4 h; R( {5 w7 d晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么