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目 录- X* l: a4 p" r
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
6 K7 [4 Z- g% F1. 简介 . . 1
3 {/ g! {" \; B5 @( c9 t! o2. 转染基础知识 . . 28 z. t7 y. ?' ^' [3 _! p* I
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
7 G) D5 E! \) W9 n什么是转染 28 d( c. R8 [0 L7 M
术语 2! |# n* I7 J: H) U P) f& h9 d
应用 3" L3 S# ^ v; m4 P6 v' U
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4; \5 O0 ? l- \" ]. I9 j+ F
瞬时转染 4
& I, k$ y) h0 P7 L; k8 h" s稳定转染 4. c# L" M) X: ?3 \0 V8 l7 Q
选择转染策略 . 5
1 k4 ~3 [/ @# s+ M. a基因输送技术 . . 75 U5 u" ` ^' l+ D! ^4 u! ]/ U
阳离子脂质体介导的输送 9$ e9 H& Z5 F& ]& U1 a7 k
磷酸钙共沉淀 10$ j6 C3 o$ L) M+ s
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 118 g3 @- W- ~- Q# l8 a
其他阳离子聚合物输送 . 127 q: y2 U! C8 {# C
病毒输送 13
3 G1 K1 o m2 c$ j6 X; U电穿孔 . 14
2 P# D' c. ]2 X, z2 k0 p, B其它物理输送方法 . 15
& D3 u, d. q" o4 Q4 b- E4 v阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
7 @- V- i+ J: X0 A* r2 ^5 s机理 161 A" Q, y7 p3 H! Y5 q9 p# ]
阳离子脂质体转染试剂 . 171 P- ^7 a! |, ]4 ]* O# o
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 195 v' a' z5 ]9 H
病毒载体的主要特点 . 194 X( z& f( |( W. Q+ o4 r
常用病毒载体 19' R, S2 }/ J: ~9 y- M
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21- }# y7 {8 d- [9 [
稳定转染子的选择 . . 23
: l( U3 d1 t2 d8 t R+ g5 o% f. m用于真核细胞的选择性抗生素 . 239 P3 I9 ]. Y* P, f" k2 Q+ b7 s
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
) S* P3 y+ c' j7 a) ?4 T$ u5 C1 P转染分析 24
* H7 k2 i: M( L: w基因调控分析 25
+ ]& Q- A' e V常用的报告基因 25! {* Y: a6 z! i1 z- P
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
6 c1 }& Y4 R4 r" h3 n, K: {) Y, U$ ]/ L常用RNAi术语表 . 26
" z2 @# z+ G8 A; dRNAi工作原理 . 278 X" w1 {3 |2 j. E, S3 ~0 u
siRNA分析 . 27- ~ B/ C1 h+ K K( x
miRNA分析 28
* j4 Q- o U. O/ M) q- [% M选择RNAi方法 . 29
* k/ d8 e6 R( h" j9 W# z8 ]3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
4 j p9 z3 G% y+ n1 o影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 309 _5 W4 ^! u9 e' M$ F( i4 t
细胞类型 30
9 N8 ?7 \0 w- r4 U细胞健康与活性 31$ Z; M2 ]7 k" }+ h2 C7 R& [/ Q2 Z
汇合 . 32# B) \, ?0 d5 S0 n, U
培养基 . 32
* ?) {1 K/ _% U0 p血清 . 32
, K% T N5 v7 `: F& b1 x$ O# R2 j抗生素 33
l, Z: o$ E! D2 j4 \' S转染分子的类型 336 B" S* b! @2 z9 H
转染方法 33$ m# U: d1 h% [ e
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
5 ]' I, X9 v2 D% J$ M0 G连续细胞系 . 342 W& G" `5 u- U/ e% n
原代细胞和有限培养物 . 352 _8 a$ l9 I# X! E- Y2 b7 {
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 369 Z7 N% s7 ~( g8 I& E- V
哺乳动物细胞表达系统 . 36) i& V0 N2 ^! _7 m
昆虫细胞表达系统 . 37/ [2 _# G9 z. q- h2 r. A8 H; r( E, R
质粒DNA转染指导原则 . . 38; _# g6 U F4 o
载体考虑因素 38
2 b2 \. m' [# J" O& H+ V质粒DNA的质量 38
- \: D$ \1 N! ?6 r# K1 u- Q基因产物和启动子 . 39
' x O6 F4 S& a8 s8 j5 y: R对照 39- t2 l/ M- y' n& ]. @
质粒DNA转染的优化 . . 39
" ?4 w% w1 P* t; h, u; L7 z3 N磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40" \% A- q! s' c4 A2 ^* A
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 419 R8 P! z3 G7 E ~* i5 c9 y
电穿孔的考虑因素 . 43
# P6 V9 G- ?1 {# w3 R稳定转染子的选择 . . 44, \) i; x' k0 |* v& E2 }
开始前 44
1 Z& _! m* H8 Y" @8 g杀死曲线 44
( t4 ?7 J9 \6 x# e7 M/ y# _选择工作流程 44- w8 S! u8 k: N2 h* [( o3 B$ z* g
选择RNAi策略 . . 46
6 N7 a( z% R. C# P0 m: G' PsiRNA与载体方法 46
- n( X. H9 | X非载体siRNA技术 47, Y5 V$ W5 S, c. D# d( v" |
siRNA转染 . 49
: k X# h' m( x载体介导的RNAi . 50
, \0 q e1 ]$ m. C6 X: A; SRNA转染指导原则 . . 51' n1 w5 K) t8 E3 ?4 M: A6 P# P# ]' }
RNAi工作流程 . 51/ D! e! T4 O! P* ^ H2 i. ]6 k
RNA处理 52- q/ z8 E1 Z8 v, [6 _9 h) @1 Q( e
转染效率 52% _% r; O( f& x9 T- g6 M
阳性对照 . 52" t6 |4 e% ^' d, g
阴性对照 52
. Q s, T/ m8 W. Q8 B共转染 53! c0 L s, v. I. C
siRNA质量 . 53
. h- T% i! Y4 c+ a9 ]+ v6 csiRNA用量 . 54 a/ c, S, s. }4 ~0 b f! F) H
转染试剂的体积 54
3 F) p% r) i6 m% [6 W9 E) H细胞密度 546 F. ~) R. a0 L, E" u
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
- b0 c) g2 ]# ]; H: x, Y. v5 S+ E转染过程中存在血清 . 55& q' V, a. t2 r- N5 O/ `% s/ R
siRNA实验成功的技巧 553 j, S0 G$ B9 _3 Z- d1 w
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56# J4 u8 O9 E6 o. @& U/ i& b
影响siRNA效率的因素 56% B9 p( B* x7 I2 n
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 574 x4 D0 X% k) X* D& \" m4 e+ \
转染产品列表 . . 57
3 T& [: r/ r! B8 p1 E9 Y: X转染试剂 57
) \. U5 {2 H. f6 ^0 h" i8 F3 BNeon®转染系统 . 585 u* i# ~6 [: Y
RNA干扰 58
4 d3 ?6 j8 @* H4 t p8 ^参考文献 . . . 59
! o9 s1 ^3 Q' w! M |
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发表于 2015-7-9 09:28
