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目 录
8 d7 w- s5 [) ]! O1 n# d: f; [/ j转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
2 l0 @! K. W6 w ?# m1. 简介 . . 1
+ m) ^, i+ k/ C) v, N# F2. 转染基础知识 . . 26 E- J0 Z: x, F6 Z \' \' o! d
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
3 l ?2 q- E% }. i+ P, s$ J' v" L什么是转染 2
1 N0 c) C' s! d0 A3 [术语 2
, }5 i2 H6 K) h0 d# D" m应用 3
8 U& a7 v* m' [/ e9 u. p& N$ a转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
2 ^8 L/ b+ l; I6 g C; s0 x/ A7 o瞬时转染 4# N: R! `' M- C9 Q, I
稳定转染 4- S/ p7 V7 b7 j, L# C
选择转染策略 . 5
7 Q6 `8 \& L0 M9 ~基因输送技术 . . 7$ n2 |7 q: H" P4 U8 ~4 Z
阳离子脂质体介导的输送 95 s7 E5 X0 X$ e
磷酸钙共沉淀 10
6 o9 ]# Y' N, p) ]DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11" J- [+ l$ S1 D& h. U7 I( M0 N
其他阳离子聚合物输送 . 127 G# {4 Z, l3 a2 n
病毒输送 13. l/ ^. i5 t) a, ^. B6 F
电穿孔 . 14
2 j9 v+ W y5 l. j }其它物理输送方法 . 15
/ |9 M$ s8 m7 F; S5 z5 e1 g4 N% K/ y阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 164 u0 C' N' y: S/ G+ N
机理 16) ~9 v, L& L7 Y1 v9 H5 f
阳离子脂质体转染试剂 . 17! Z+ Y! ^7 r: p7 h
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19. {" J M& R c" i8 h! |
病毒载体的主要特点 . 197 [, ~0 o4 d# E7 N5 \3 W
常用病毒载体 19
( Q! n( H7 @8 O# Q" Q( \5 S$ f% RNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
% w I/ A+ [! O- Y稳定转染子的选择 . . 23, g8 n; z" s( H+ p
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
+ W' L# A. R/ h' I& [报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24, r9 Z `5 J8 s W) j. ?7 g8 h
转染分析 24! F3 ~8 ?) G5 [) @1 \; [
基因调控分析 25' }" D& g/ E ^6 k
常用的报告基因 25
( z7 W# p- P, P) |0 T+ kRNAi和非编码RNA研究 . . 261 O+ r6 @9 l2 ~' V# i- p
常用RNAi术语表 . 26) ?' V8 z% G/ @/ r, w5 \: O+ P2 _
RNAi工作原理 . 27
! z$ Q/ T; {) R; b' i# A5 n- h4 BsiRNA分析 . 272 n. P* k* D" E1 E8 H! j/ j3 Y$ i
miRNA分析 28
}- X5 L3 D" S- a选择RNAi方法 . 292 {0 P+ e+ S+ b' j- J7 d: K" R% B: y
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
7 ]4 c2 a, y- @, T z* o& \7 a0 g. Z影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
9 V' g; t1 ~0 t# a/ o细胞类型 301 R8 T- A" ?7 x# K0 u& ]* ?
细胞健康与活性 314 r7 e, y2 n' F$ G( E. F
汇合 . 32
2 f$ [5 c+ ?) \! n) R4 Y8 K培养基 . 32: b( C! V/ X8 c! ?0 Z0 d. a
血清 . 32
, r/ G! P$ b c$ }, T5 L抗生素 33
I* F" `5 Z& w9 d7 u0 Z6 B; l转染分子的类型 33
$ e* j& e, |' }/ Y转染方法 33
% u0 L9 ~" l& ] }, l/ B7 S! Q选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
$ ^& D+ `) \" e% A连续细胞系 . 34( i [. m: F3 H# s4 {3 P T
原代细胞和有限培养物 . 35
" Z Y+ D% }! A* M) `) |5 o选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36* N( a7 g2 v' y5 d& ?
哺乳动物细胞表达系统 . 36
( H7 k! O" i5 @1 D昆虫细胞表达系统 . 37
1 X' K3 G- y7 m, g4 S- ?质粒DNA转染指导原则 . . 38
. \( p- r. W$ b载体考虑因素 38+ i% {( k3 I/ T% m7 I
质粒DNA的质量 38
/ A( z. _! N+ \基因产物和启动子 . 399 @0 `# h& k4 P
对照 39& y [+ E' X. g4 c9 H' X8 [
质粒DNA转染的优化 . . 39
7 b: t. C4 q1 n l. I' z磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
! |8 P* L3 [6 E: i阳离子脂质体介导的转染考虑因素 417 o+ ^: q+ R+ z% L8 z0 T
电穿孔的考虑因素 . 43 @; {# B2 i# n6 x3 w# N* ?6 |5 O
稳定转染子的选择 . . 44
9 m9 `7 |) |- \2 F" W, W开始前 447 F# f# z8 {$ [, i- s) V9 j, A
杀死曲线 44
- l! `2 `2 d2 A5 N2 ? F( k# S6 p选择工作流程 44
7 V( i2 z; F+ s9 [ k+ X0 ~* ^选择RNAi策略 . . 46$ W; f* _! _$ u; i# ?. G
siRNA与载体方法 46
% `2 t% A8 j% W非载体siRNA技术 47
% S$ ?* P% ]: M! f K. FsiRNA转染 . 49
' w+ Y7 \4 B( p载体介导的RNAi . 506 _% d# T: {* W" c
RNA转染指导原则 . . 51
# h' Z2 M/ \3 O. |2 IRNAi工作流程 . 51/ u, X1 {& U) |! U# M8 \6 E# V
RNA处理 52$ ?5 k' a4 v+ m- i3 ]
转染效率 52
3 V2 [2 [: V0 w阳性对照 . 52
/ P0 G7 _* K* H/ t& ]5 ]阴性对照 52" ]0 i8 z8 M8 r7 }8 I1 O# v
共转染 53
) K. y' h- Q" d( V9 z2 E# YsiRNA质量 . 538 b/ U: E- h% b" L$ a; |: y
siRNA用量 . 54& C8 ?. i. v/ p) C
转染试剂的体积 54, C/ p; {* O" W+ k- s% \
细胞密度 54( O* e7 p" q# R8 g" T P
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
7 R6 K/ q X2 k! \3 D2 [* Y( o+ W转染过程中存在血清 . 55
{8 V; W7 }4 JsiRNA实验成功的技巧 55
! L! I+ M% G8 lsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
0 Y) Z, z4 l W. W7 x/ B o: J' Q影响siRNA效率的因素 561 H' _8 I1 p3 D' L% M( ~3 y
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 576 g9 B+ t! i% L/ s/ A
转染产品列表 . . 572 P; Q5 E$ {: ~5 A$ Q# t z9 z& ^
转染试剂 57
" Q& x/ s. \( V& _, U% XNeon®转染系统 . 58
- {" w( E9 r; U- K DRNA干扰 58
2 o. c! D4 z3 t* o/ d: T E# T参考文献 . . . 59
, q4 Z g5 n+ c" \0 R4 R |
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发表于 2015-7-9 09:28
