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目 录, S9 F4 l H) L, a) R
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii: x. [: M( g) r
1. 简介 . . 1' x* _/ u; @, z' g* t y/ v. G* x
2. 转染基础知识 . . 21 m0 f7 k/ n% F1 R
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2$ |5 z0 e# z4 J7 R! \( s! f3 g
什么是转染 2
) c( ?+ j0 d9 r; _2 |' g2 K) L8 S术语 2) ^1 U( {, { l/ U0 z: p
应用 34 C! D+ y7 z, B: s3 M6 G
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
5 L6 o7 @0 M8 w& R! p2 j% {6 A瞬时转染 4: s& E# R# E3 S: H5 I9 @% }
稳定转染 4' J9 U$ g2 [2 D$ T
选择转染策略 . 5
0 z! t8 A+ O1 p/ u/ y' e9 n( B基因输送技术 . . 72 }0 M o. w1 J6 g; `* n' J
阳离子脂质体介导的输送 9
* z2 ?1 d' M, ^5 d8 U& l" O磷酸钙共沉淀 10 q q5 a) \" u* e( }, H
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
: u2 ]6 e5 h0 I+ G; U/ z其他阳离子聚合物输送 . 12
0 n# ]* m; P9 v2 G' o- j病毒输送 13
O' E% z, ^, Y3 [2 \* W2 r/ P电穿孔 . 14
2 _5 q# r, k$ [% n+ U其它物理输送方法 . 151 }: J7 u F9 B1 K7 Y- d" e" z3 o
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
7 t7 s" x: w" e, @1 f4 q机理 16
; w# x0 r* B* q阳离子脂质体转染试剂 . 17 s( d" T6 y6 O% F4 [6 `3 m
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
3 Y# o. X2 B0 M4 E) ]) [病毒载体的主要特点 . 19
/ U( p- L+ R- G5 q& b" N [- [常用病毒载体 19- |9 _, q1 V2 ^
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
; ~* ]0 z% W; r- h8 c稳定转染子的选择 . . 23
5 Y5 V; M7 ^( u9 ` ^+ p用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
0 Z& Y0 i5 b: x9 U+ ^' q报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
; j% z3 H* k1 P3 C% N1 l6 q, |+ {转染分析 243 i q4 }. ^! d" H1 W7 Y5 ?9 Z
基因调控分析 25
! U. q/ I5 e2 U6 x1 x常用的报告基因 25
( k: I7 }# c* Z5 p5 t! \$ bRNAi和非编码RNA研究 . . 26# N% P4 F! V6 z/ w9 ]4 d
常用RNAi术语表 . 26
. o- a7 @2 O; u8 M# VRNAi工作原理 . 27
3 _1 z% E o* Y$ }/ z* U8 ^4 f- usiRNA分析 . 274 I) P6 M1 V" e4 Z
miRNA分析 28
. y, J2 E1 U5 b! }选择RNAi方法 . 295 [/ _& z# g5 ?- ~/ Y% w, _/ g
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30( h E Z+ m, O. ~/ B0 r
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30* B3 h7 `9 Y! ~+ v l
细胞类型 30
8 I$ b( Y$ Z) K1 m细胞健康与活性 315 `7 j% \$ [6 R- x# [ E( W& H4 y
汇合 . 32' ?) R" V g+ b9 N3 e
培养基 . 32
, @$ i, D$ k# m1 e M6 Y# P血清 . 32+ e" Y) w4 D) t
抗生素 33
9 u' v" C4 @6 n( p8 W7 @# Z转染分子的类型 33
$ }+ Q! y2 I7 J! ^& B7 D% Y转染方法 33
6 h" G# N" e7 x v% x: ?选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343 N" A' C) x/ u* }# S$ t+ l
连续细胞系 . 34: H6 q. }8 i" i$ V
原代细胞和有限培养物 . 35
$ S* ~' ^" ^4 z+ G选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36, R+ `3 k; w, Y8 B( z/ V
哺乳动物细胞表达系统 . 36
+ N/ A! k# ~0 B7 H& }昆虫细胞表达系统 . 379 a6 J: [7 I* I H* w
质粒DNA转染指导原则 . . 38. _$ p% R: Q9 V6 G6 }3 S
载体考虑因素 38
& I0 Y" y: \) L, Q* ~质粒DNA的质量 38
" u+ S3 Q7 X6 {0 V( X% z& _基因产物和启动子 . 39& J' I9 k' H+ }0 @
对照 39
1 h3 _8 B- k4 M9 k, I9 P$ N5 B: y0 @质粒DNA转染的优化 . . 398 d- I) k; c0 r. g
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40% [; \8 V& h3 V" M
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41; X9 m. Q! J/ Z6 t/ h4 n$ f# M4 L
电穿孔的考虑因素 . 43
& s- k# Y/ V& B0 Q8 X' A8 E' t) q; v稳定转染子的选择 . . 44
! P( x, [7 B W开始前 44
0 f) v; N$ G! {6 c0 ~" L4 o6 e杀死曲线 446 G5 a: \: C2 ?; U5 A$ {1 X
选择工作流程 44# x: E" }0 O4 i4 p& J$ f
选择RNAi策略 . . 46
2 ~3 j) T5 `9 m/ w( @# |siRNA与载体方法 46$ Q/ L3 \" o1 K2 \6 F
非载体siRNA技术 47
: d5 Q1 w1 \; y" ], q+ L6 N9 CsiRNA转染 . 49
% n0 C5 {1 W4 Z$ L5 R- N1 Q/ B" X载体介导的RNAi . 50 |0 d3 h+ H) ~& J# q5 ]8 G5 E
RNA转染指导原则 . . 51% C. S) g0 \; p: P
RNAi工作流程 . 51
{9 f; D2 n$ c. R iRNA处理 52 l' \% j" k' A' m( \( z/ P
转染效率 52
+ A- S, f: A1 O' v* I/ M! b- ?阳性对照 . 523 f; T2 ]# `0 a+ } ?. m" Y$ S$ M
阴性对照 52# N2 G. q4 L7 T- s% z2 ~( U' F
共转染 532 I% p5 O# r X3 b; C$ }; I' x
siRNA质量 . 53: \/ ?* `3 ?9 a8 O& |" E, ]$ U: M
siRNA用量 . 54$ A- e) f$ U# D' x& U" G
转染试剂的体积 54) `2 R" V/ e2 h
细胞密度 545 g; z+ `; u) g- n3 ~6 P- D8 m
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
: K" j; D/ c$ d2 N* p" h转染过程中存在血清 . 55
6 m& f% T2 x: |' N, DsiRNA实验成功的技巧 55
4 B7 n h- P8 ^# I: |siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
! {) p3 T6 A8 f5 E- d3 A影响siRNA效率的因素 56
! f a7 i& O E* x5 g+ z附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
0 u, E; R* F4 u转染产品列表 . . 57
- W- ?5 x. e2 J. Y! V8 K转染试剂 57- v' V6 c5 g" z
Neon®转染系统 . 58
* Q0 e- ]: {. @- x, Z2 \7 {RNA干扰 58
/ o" L: _: n7 E; t) p& J参考文献 . . . 59
: _% N+ b; x2 O7 D! J' c2 M |
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发表于 2015-7-9 09:28
