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目 录, L2 H: d' w0 }1 f5 v
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
* J$ ~* I. b% D2 {% E. A& |1. 简介 . . 1
# i/ y8 O- l; S5 Z# ]2. 转染基础知识 . . 2% }, T2 W) i( M+ I2 N
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2- _% z: c' \! l; U& J2 }: P
什么是转染 2
7 k$ H1 E6 d7 O! [- L, W( h/ X# L, g术语 2# m0 X) P) Q+ l y4 @
应用 3
I+ [ v% F9 L; U; a2 B转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
5 E. _, ?- M) K5 o. A& Z瞬时转染 4: R8 m2 J" r3 O0 ]2 N; \& v
稳定转染 4# Y& J1 K# H: o& F: B
选择转染策略 . 5
2 B% k% T9 R8 p+ ]* }基因输送技术 . . 7
8 Z! }3 o0 v! \' X& ^7 i# {. P, V阳离子脂质体介导的输送 9
* ~. ~0 b1 e; w8 w7 `" m2 n5 E! Y磷酸钙共沉淀 10
/ H: L }( k# jDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
& @+ R1 d. }+ V* K% E其他阳离子聚合物输送 . 12
, ?( h. ]# Y' g病毒输送 13
n1 }/ s6 u! l5 ?! P( A电穿孔 . 145 V* V7 m7 H' h: X- z2 d; @1 P2 x
其它物理输送方法 . 15
. f8 C# F- l( }9 Y0 n% U7 ]3 Z阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16) h5 ^3 J3 Q8 U% w
机理 162 l* |! F9 V7 i: s
阳离子脂质体转染试剂 . 17
& ^( M( _$ l$ ], ]9 q/ t病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
7 n9 O6 S: F6 M& h病毒载体的主要特点 . 19
) Y" u# R5 r" w8 H+ I常用病毒载体 19
7 {6 ?- v d+ j4 W4 VNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213 x5 k1 w8 k! k6 n |" |
稳定转染子的选择 . . 23
: u& B: S) C$ J! t$ D8 V用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
4 @: [1 @/ c$ r& [0 {9 u. P- ]报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24+ h6 B+ @8 ]1 ~
转染分析 24
# S9 g1 k. R& c基因调控分析 259 L; P( M* ~$ p. C6 r7 r1 D
常用的报告基因 255 Q& j* p6 D6 n e0 E+ T
RNAi和非编码RNA研究 . . 26- w+ |4 M/ o3 L! W
常用RNAi术语表 . 26
. w9 l d+ M0 A {& b1 X. K# c2 dRNAi工作原理 . 27
9 [: N9 W3 k8 e0 ~% QsiRNA分析 . 275 ?4 V/ `$ {$ j. k( Z* V4 Y F
miRNA分析 28
8 v, N, R% j3 k* ^* |. @# L, J选择RNAi方法 . 29. t4 D/ m& d% `/ p- Q
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
& a# z( y* Y* Z( _& D, }% E影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 306 \9 w3 s1 V6 r
细胞类型 30
" `7 F7 l2 g# Y& U细胞健康与活性 31* Q: v% F! u f# T# H' t5 ?4 v) v
汇合 . 32
. v9 B9 j* B, Y0 ~, G培养基 . 323 j' z* k0 O7 z K- H
血清 . 32# ^1 ]( Z8 G; E0 N. f' k/ K8 [; ?
抗生素 33
6 S9 {0 P8 Y- t转染分子的类型 33
: A% N# ^& y- m转染方法 33' O$ l1 t+ N _
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 349 G+ c5 l3 l2 E' M6 k
连续细胞系 . 34: O8 e# R ?$ e9 Y3 `/ R& N; H
原代细胞和有限培养物 . 35
% q( {/ Q: }/ g: j7 u" Z$ X _选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 367 ~2 Q" o& ~6 N2 }
哺乳动物细胞表达系统 . 36 ~8 B% Q3 h# z
昆虫细胞表达系统 . 37
6 i& R [- M" R$ {- |质粒DNA转染指导原则 . . 38
4 D2 m0 ]0 u. L+ Z7 n+ F载体考虑因素 38, M2 H& ^% Q% W4 u: R# ^7 k
质粒DNA的质量 38
& a, P4 A- o( E) c4 Z+ d基因产物和启动子 . 39
) @. s1 ^4 Y4 X& k- p9 i9 U对照 399 H; m4 P3 r1 ?+ I
质粒DNA转染的优化 . . 39
5 @: Q. w& A& T9 Z' v- a磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
' L3 T6 ?0 g, j: ?阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41( P k" p& J2 q
电穿孔的考虑因素 . 43
) R, A; @- ]# f& V8 Y V2 g稳定转染子的选择 . . 44% Y M. G* g: a1 E
开始前 44
- z# p, d5 D6 w* }8 w# w+ Z8 [8 |杀死曲线 44
* n1 X7 n$ z1 z9 o& [# @2 M N选择工作流程 44
2 S9 b t! S4 x+ E) G! W选择RNAi策略 . . 46
: a7 ]3 ~0 w2 i9 D! KsiRNA与载体方法 469 @6 Q) r+ I/ g+ ]. w
非载体siRNA技术 47
: ]2 w7 `8 ?4 r' zsiRNA转染 . 49. H) k( B& J0 a9 S$ X! o; m
载体介导的RNAi . 50
% A& ]$ f# |. q/ ? eRNA转染指导原则 . . 510 I2 Y, T9 |# i% x4 {
RNAi工作流程 . 51
: G* q+ Z5 z+ Y4 i# i; E: TRNA处理 52/ b. C8 |) H& b" R) d6 @
转染效率 52
3 G" I H/ A6 N- V3 P0 R% }% w; ^阳性对照 . 52
, s. y* a& [" F, _阴性对照 52/ m" y# w/ T8 T$ p
共转染 530 y2 v9 s* ]5 @1 U
siRNA质量 . 53
9 {2 K+ W" Z2 L. N8 o! S1 i4 csiRNA用量 . 541 J% ^! y2 T, b8 z. h
转染试剂的体积 54
7 k0 }1 k5 D# D+ U# P细胞密度 54/ \3 n7 s! H0 [" }( A5 ~! P
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54- V! D- ^4 _" \# w
转染过程中存在血清 . 55
4 i# ]. U( F3 A- [. R" DsiRNA实验成功的技巧 55# {) }, q2 R: i& I) n
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56" _& S+ M7 h" ?+ h4 l
影响siRNA效率的因素 56) j) Y* |; D7 Q8 v f
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
3 j s0 Q/ e* o$ `1 `转染产品列表 . . 573 ^% f3 M& \/ R8 L2 \0 J6 U
转染试剂 57
1 T1 Q" x. O0 E) o( Y" j' VNeon®转染系统 . 58
5 ~. D* N x# ]- M) aRNA干扰 58
% I* L2 \$ J% J' e! a参考文献 . . . 59# W7 ]6 `2 l; w# I7 @4 i
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发表于 2015-7-9 09:28
