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目 录
1 q% ^1 b/ t6 C- E/ s( T转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
( C1 v) W) V3 G9 b1. 简介 . . 1
! B4 [ c! _4 n6 n9 M2. 转染基础知识 . . 2& F9 A. h0 y- J" m. E9 E2 t3 v- q
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
- T6 ^$ a4 R' L& m! ^8 p, p- k2 V什么是转染 2- x9 Y; d0 H; l# G) S) R2 [# j
术语 2% ^! w% a& E6 q0 |6 n
应用 3
- Y' G! G* u1 W( R转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4, d }2 H/ C4 @6 i
瞬时转染 4
7 t* q6 E* a* C" w$ ~. }$ B稳定转染 4
" d( h3 Y+ X: a1 m7 f选择转染策略 . 5
" I0 @& k) `' k( Q/ e* J基因输送技术 . . 7
) I, o3 r! d+ }/ t4 Q阳离子脂质体介导的输送 9
7 z4 Y' ?0 _: z% F磷酸钙共沉淀 10( t% d7 J! X- m6 p: J& ^
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 111 j$ r9 t: ^7 T
其他阳离子聚合物输送 . 12
, Z7 o$ G' P) R; C( U& Z+ Y \病毒输送 13
+ I, D0 k' ~# W( D% I" n& B5 |! Q电穿孔 . 14) k7 K& |1 ^0 Q- D! }- Z
其它物理输送方法 . 15
2 G* |0 B/ N' D* y阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
0 f' l( {& H! ^$ z3 Z: ]机理 16
+ x6 ^8 `+ a. m; Z6 T* V阳离子脂质体转染试剂 . 17
7 G3 V3 J# [/ m) ` Y; I% d1 }1 r9 t病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19; D5 u, U% G; [! U
病毒载体的主要特点 . 19
! [! g- W$ R: B$ f常用病毒载体 19
, S4 M3 J8 P4 B" v) S. p3 M4 B, m. a6 GNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 216 P9 J% o7 ~! I0 P9 C8 S
稳定转染子的选择 . . 233 ?7 s1 f2 s/ E1 X; `' I
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
* ^$ J! P! I$ b+ ^4 \报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24. D. H$ F8 i9 b! P% S
转染分析 24
- V2 p& l5 w7 k5 c! F2 ] O# s基因调控分析 25& e7 b3 C8 ?$ o8 F
常用的报告基因 25 Z: `" [' Y' @$ _# J
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
$ e. @1 |: N8 g# y K6 O常用RNAi术语表 . 26: b: x% N' d" h) C/ C; g
RNAi工作原理 . 27
4 e" h1 X2 z$ K B# ~, rsiRNA分析 . 27. ^8 L7 n& v4 G0 A+ k
miRNA分析 28
; A% {$ d* R" J0 [0 p% O R选择RNAi方法 . 29# c# c) G3 r4 w2 v, D5 _
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
* C% D: p- W# n: H, T影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
4 A+ B" h5 p2 s% o6 f1 j细胞类型 30& E$ n w8 F8 A' x! D: a
细胞健康与活性 31& m; }# p( u O: D8 S; I
汇合 . 32
3 ~+ |# |! J2 T. [, p% q% e- d培养基 . 321 X" r; y# n- h9 Z3 W
血清 . 32/ {0 X5 a- g% t' J
抗生素 339 g4 g5 V$ ?. b* y
转染分子的类型 33. Y! |3 h0 F' V6 s6 A2 G0 l
转染方法 33! a" | y% `8 \0 b
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
6 o* W- c7 Y- [% M& z* R# }) y连续细胞系 . 34
6 Q+ c1 m% M$ H' n原代细胞和有限培养物 . 35
, {9 c/ I }+ w' H选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 361 W- E7 B/ d9 M. N
哺乳动物细胞表达系统 . 36" h& S+ c0 i8 G m. F* P' m
昆虫细胞表达系统 . 37, ]0 T2 S, X8 G' b. }5 w
质粒DNA转染指导原则 . . 38
; y5 X/ o$ W. m; |) D$ s/ L载体考虑因素 38( Q3 R0 E) `* [4 A! V5 G9 E
质粒DNA的质量 388 _- k7 M7 L. M+ |& u1 `$ T* x- O
基因产物和启动子 . 39' [& `9 X5 x! Q5 K' j' q0 q/ Y4 O
对照 39
# h( Z+ [& T6 q9 e质粒DNA转染的优化 . . 39
9 S* ] A) `8 b% |8 j7 q$ V磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40: E$ _5 q9 _' {, a9 {
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
4 E. L ^$ k, T0 F' e$ W电穿孔的考虑因素 . 43
# _9 _- i1 g( n/ ~, l: Q$ d稳定转染子的选择 . . 446 n# ?- r. ?7 }' V
开始前 44" V. E1 l' ?9 ?. T
杀死曲线 449 m1 K F6 s3 U4 w9 s3 x& q
选择工作流程 44
2 r1 f/ |# j6 H( h& X ]选择RNAi策略 . . 46, a, W# w5 x) _1 v4 h
siRNA与载体方法 46
* C! V9 H8 z c( G4 ~6 p6 u非载体siRNA技术 47
6 |0 \$ C! L" I8 ^5 g* ?1 `siRNA转染 . 49# N& p% v: \/ h
载体介导的RNAi . 50
9 _" w. U5 U1 E9 W% l# H0 c& aRNA转染指导原则 . . 51
5 _! }/ Z; R% j' C" `" Z- `7 G/ X1 L3 WRNAi工作流程 . 51
7 H5 n {. y$ ?4 B# H+ HRNA处理 52
W$ i% ?" |0 n- H7 \1 x* [转染效率 52+ ^% G8 r* u8 S9 t& k& i
阳性对照 . 528 s3 j5 u: b, ?' w
阴性对照 52
( b1 K. K. z( m/ i! D共转染 534 t' A) {7 |, A6 v* D
siRNA质量 . 53
4 D5 G f- U" y; v2 ^siRNA用量 . 54( \/ v# J, C* x* x8 {- b
转染试剂的体积 54# v. B( T/ S. g& P& E! B7 F( [
细胞密度 54' E) E9 k- h! i, n
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 549 m @# F4 j; X; @$ C, l2 p& \' Q
转染过程中存在血清 . 55* ~4 P1 ?2 o- z9 _* E" t3 v
siRNA实验成功的技巧 55& i& g a$ {' r& |( y$ F
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 565 N2 S& h; {/ d$ u
影响siRNA效率的因素 56' T9 m6 o( _. H
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57$ C# ]0 `4 v4 T
转染产品列表 . . 57
! d* M8 m! U4 v, {& `5 b转染试剂 57( `4 q( R2 m) G7 I/ j' k
Neon®转染系统 . 58
3 p f- k& p9 b) ?/ hRNA干扰 58# ^" k2 I+ ~2 I: v. d! [
参考文献 . . . 59
( ?) T8 C' ] a6 e+ ] |
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发表于 2015-7-9 09:28
