求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

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8 o2 _; Q1 u" d  i: E/ M8 s谢谢。feeder的话，是不是一般一周就要更换新的，请问你一般复苏后多久就传代了呢

nichifanlema2

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7 Y2 U+ o/ \4 X1 p' A8 e+ J& B常用的就是Y27632,。关于feeder密度，T25培养瓶可以复苏50-80万feeder。

冬天的雪糕

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7 _) o0 h8 Z6 A- l
非常感谢您细心的解答！6 v; ~8 C8 ]* f& ?) v* |$ X
请问除了y27632还有什么可以提高复苏率吗？mef密度问题，一个t25大概多少比较合适呢？

wangshumin12311

为嘛一定feeder养，，，

watchen198891

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' Z/ W: |0 A; m7 ^) m
我也没有加y27632，细胞可以吹散，但是只能轻微吹打，不能反复吹打，有的时候我基本不吹打，手指弹几下，沉淀飘起来就直接加入培养皿中了。离心的话就800rpm，3min。培养基更换一般第一天观察一下，如果液体变黄或者克隆长出较多则换液。我是这样做的，细胞状态还可以。

nichifanlema2

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0 m: b  F; u7 @0 i( q* P$ C* b
1 N4 R) i# G& l7 u; n; u2 A细胞吹打过度会加重细胞死亡，稀释冻存液时要缓慢滴加，一般4-10倍体积稀释没有问题，但是5倍以上稀释可能没有太大的必要，因为一方面浪费培养基，另一方面离心不太容易。可以1000-1500rpm离心5min，或者200g离心5min。

冬天的雪糕

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

冬天的雪糕

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？