求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。( A1 B8 S; Z4 r! B
有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？: q& D6 M2 Y) k" h, Q2 p
非常着急！！

nichifanlema2

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用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。

watchen198891

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血清加10%的DMSO或者培养基加30%血清再加10%DMSO。我这样用的，效果还行。血清太贵，后面就改用培养基来代替。复苏的时候没有多大的问题。

watchen198891

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9 Y' W3 L1 S, B4 H( m/ p
这个到不是很清楚，一般来说ips克隆足够大了就直接传代或者冻存，至于MEF能够支撑多久我没有注意，ips克隆到一定程度很容易出现分化。我觉得MEF不能够长期支持ips生长，要是你的ips长时间不能够形成克隆状态，那你的细胞应该要检查一下。

冬天的雪糕

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我还想请问一下，y27632是用ddh2O溶解吗？浓度多少呢？还有就是10ml培养基的话加入多少y27632比较合适呢？谢谢

冬天的雪糕

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9 Q1 c6 }( X3 ?6 b+ |2 h+ x还有请问你的冻存液配方是什么呢

冬天的雪糕

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我的意思是mef最多可以支持ips生长多久呢？好像听说最多不能超过一周是吗？

watchen198891

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" F" [" F1 W' @3 O5 O0 v3 NMEF更换是什么意思？是说你铺好没有用可以放多久吗？还是你准备传代的时间？iPS传代时间一般跟你克隆大小确定，当然如果养得比较好的话基本两天就会传代。

冬天的雪糕

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5 `8 B. y0 I% S
) q0 a4 M# D* Q非常感谢
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冬天的雪糕

回复 wangshumin12311 的帖子
, Y& h0 z. p" C% |; e* f+ [" q5 |6 R8 ^; h; _1 {% Z
比较省钱，嘿嘿