求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。; J& b+ C. D1 `- E( i& t
有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？
+ w; A5 t. ^7 f非常着急！！

nichifanlema2

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; G+ W, i# i5 z  N- L$ z9 P4 y
! t; N, K, y; f9 @8 R用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。

watchen198891

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. C5 y# x% S6 J1 f血清加10%的DMSO或者培养基加30%血清再加10%DMSO。我这样用的，效果还行。血清太贵，后面就改用培养基来代替。复苏的时候没有多大的问题。

watchen198891

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9 f& @# A6 D# D( K% B0 J
这个到不是很清楚，一般来说ips克隆足够大了就直接传代或者冻存，至于MEF能够支撑多久我没有注意，ips克隆到一定程度很容易出现分化。我觉得MEF不能够长期支持ips生长，要是你的ips长时间不能够形成克隆状态，那你的细胞应该要检查一下。

冬天的雪糕

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; V! [. e0 @: e" l
0 P, M5 ?  S9 F我还想请问一下，y27632是用ddh2O溶解吗？浓度多少呢？还有就是10ml培养基的话加入多少y27632比较合适呢？谢谢

冬天的雪糕

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% R5 _0 I2 L# ~; v# w! Z* a- ^% I- f$ f7 J
7 R; L9 }4 `! K( \还有请问你的冻存液配方是什么呢

冬天的雪糕

回复 watchen198891 的帖子. ]: N  x" ?# @/ r4 P

' Y1 }- `$ ?1 Q: w; n' H我的意思是mef最多可以支持ips生长多久呢？好像听说最多不能超过一周是吗？

watchen198891

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4 u* p. t; o% V9 s7 d! u  l4 q4 }0 O0 S5 N! e+ [6 X$ ~' ^- B
MEF更换是什么意思？是说你铺好没有用可以放多久吗？还是你准备传代的时间？iPS传代时间一般跟你克隆大小确定，当然如果养得比较好的话基本两天就会传代。

冬天的雪糕

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8 r) E! O/ i3 t非常感谢
& q1 i$ z+ q" Z' x$ ~

冬天的雪糕

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. y. a5 z% K% m
- ?6 ?8 Z- p& M$ a. z& o5 ^比较省钱，嘿嘿