CIK贴壁并变成了长梭形

乖乖咪咪

机采外周血分离的时候不分层，血清与分离液混合看不到分界，无细胞层出现，细胞混悬在液体中，只有部分红细胞沉淀。做CIK培养，培养第二天细胞基本都贴壁了，第三天发现贴壁的T细胞多数已变成长梭形，在此之前培养液中加了CD3、IL-2，附图，请有经验的大神帮忙分析下是怎么回事，多谢！
* k1 T5 K/ H: F7 ]4 ]PS：病人病情是右小细胞肺癌四期，目前已不做其他治疗，采血前血常规指标多项不合格，比如白细胞是13.6·····等等，不知道这是不是导致这个结果的真正原因？跪求大神帮忙！！！！

guanjun1314

我也试过发现这种情况，针对这种情况个人认为如果操作规范的话，要从病人的标本考虑，只是个别差异而已

清如许231

目测是手采的，白细胞太少，用磁珠钓吧~~

zmfang555

这种情况我遇到过多次，是由于患者自身的原因，血常规异常导致细胞密度异常，因为ficoll分离是靠密度梯度的原理进行的，细胞密度异常后通常的离心力500g-800g分离效果较差，含有较多杂细胞，如成纤维细胞还有血小板等，导致后期培养异常。遇到这种情况多次分离也不管用，可以降低离心力，延长离心时间，会好些，也可以采用其他方法如羟乙基淀粉沉降法等。

roosevelt9999

你可以拿着他的血常规报告跟别人的对比一下，如有白细胞有13.6培养起来问题不大，只是红细胞会偏多而已。这样的现象，主要是他的红细胞压积，浓度等偏低，按之前的离心分离，红细胞离不下去，再一个就是分离液有问题，都可以对比进行操作

御剑红尘

看分离的效果，明显不好，没看到明显测白膜层啊。楼主怎么吸得单个核细胞？至于CIK贴壁，这种现象也是有的，多培养几天看看。细胞状态不大好，多加点自体血浆或白蛋白培养。也可以轻轻吹悬细胞，换瓶培养试试。再有就是病人本身的状态不好，免疫细胞活性变差，也会造成不好养。

小刘

不用客气，做实验就是要细心细致才不会出错，就连两个同型号的离心机都有可能出现离心力大小不均的情况，所以以后操作是注意就是了，这个论坛就是你做实验的坚强后盾，有问题就说，能帮到的都会尽力去做

乖乖咪咪

回复 mkhorse 的帖子; g+ O! g* z8 B/ u+ @8 l9 X- {+ ?
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实验室没有血细胞分析仪，病人第二次采血培养后细胞的状态也是如此，贴壁并且呈长梭形。所以分析应该是病人的细胞问题。

乖乖咪咪

回复 小刘 的帖子! t6 W% ~0 n$ m( b  w  u# R4 v$ k

& _8 b: D. L- \: A( x. [- ~! l谢谢您认真帮我分析，原因找到，确实是离心机参数的问题，是我没有足够细致认真才导致的

乖乖咪咪

回复 teahouse0802 的帖子7 `) s) f9 j' y& b* ]. I! o3 t5 E$ Z
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是其中一台离心机的参数被调过，我没发现使用了才导致这样的离心效果